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 首頁(yè)>>產(chǎn)品展示>>細(xì)胞培養(yǎng)>>細(xì)胞系>>293 HEK-293 (胚腎細(xì)胞)說(shuō)明書

293 HEK-293 (胚腎細(xì)胞)說(shuō)明書

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更新日期:
2024-08-29
點(diǎn)擊次數(shù):
2145
產(chǎn)品特點(diǎn):
293 [HEK-293] (胚腎細(xì)胞)說(shuō)明書的相關(guān)產(chǎn)品:AD檢測(cè)試劑盒價(jià)格adropin0.1AP2A2檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)Adaptor-Related Protein Complex 2, alpha 2 Subunit1Ago-2檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書Argonaut20.1DHX9檢測(cè)試劑盒規(guī)格DHX91
  293 HEK-293 (胚腎細(xì)胞)說(shuō)明書的詳細(xì)資料:

產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱規(guī)格貨號(hào)
293 [HEK-293] (胚腎細(xì)胞)說(shuō)明書1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶YS-01X6321

產(chǎn)品名稱:293 [HEK-293] (胚腎細(xì)胞)

規(guī)格:1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

生長(zhǎng)培養(yǎng)基:MEM(ATCC改良)+10% FBS+1% P/S

名稱293 [HEK-293] (人胚腎細(xì)胞) (STR鑒定正確)

別稱Hek293; HEK-293; HEK 293; HEK:293; 293; 293 HEK; Human Embryonic Kidney 293

背景描述293 [HEK-293]細(xì)胞是剪切過(guò)的人腺病毒5(Ad5)轉(zhuǎn)染的人胚腎細(xì)胞形成的永生化細(xì)胞,293 [HEK-293]細(xì)胞包含并表達(dá)轉(zhuǎn)染的Ad5基因。早期報(bào)道中指出,293 [HEK-293]細(xì)胞基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA,但是現(xiàn)在明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過(guò)對(duì)Ad5的插入點(diǎn)的克隆測(cè)序發(fā)現(xiàn),Ad5的1-4344位線性核苷酸整合入293 [HEK-293]細(xì)胞19號(hào)染色體(19q13.2)。293 [HEK-293]細(xì)胞為人類腺病毒載體擴(kuò)增的宿主,可表達(dá)異常的玻連蛋白的細(xì)胞表面受體,由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。

種屬人

年齡(性別)胚胎

組織來(lái)源腎;以腺病毒5DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化

生長(zhǎng)特性貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞類型轉(zhuǎn)化細(xì)胞系

生物安全等級(jí)2

生長(zhǎng)培養(yǎng)基MEM(ATCC改良)+10% FBS+1% P/S

推薦傳代比例1:3-1:4

推薦換液頻率2~3次/周

倍增時(shí)間~24-30 hours

凍存條件

凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度:液氮

培養(yǎng)條件

氣相:空氣,95%;CO?,5%

溫度:37℃

致瘤性Yes, forms tumors in nude mice.

受體表達(dá)情況vitronectin

注意事項(xiàng)該細(xì)胞貼壁松散,操作時(shí)請(qǐng)盡量輕柔;換液時(shí)需預(yù)熱培養(yǎng)基;收貨如有大塊脫落的細(xì)胞團(tuán),為正常現(xiàn)象,請(qǐng)按照收貨注意事項(xiàng)處理。

圖片13.jpg

冷凍保存細(xì)胞之方法?

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。


實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:

1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;

2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;

3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;

4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;

5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。


實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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小鼠Ⅸ)ELISA試劑盒    用途:僅供科研

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人B-淋巴細(xì)胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA試劑盒     Human B-Lymphocyte Chemoattractant 1, BLC-1 Elisa Kit    96T/48T

人結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA試劑盒     Human connective tissue-activating peptide Ⅲ, CTAPⅢ Elisa Kit    96T/48T

a Kit    96T/48T

Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin E, FcεRⅡ Elisa Kit    96T/48T

G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅢ G Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅡ Elisa Kit    96T/48T

G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅠ Elisa Kit    96T/48T

G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅢ  Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅡ Elisa Kit    96T/48T

G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA試劑盒     Human ReceptorⅠfor the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅠ Elisa Kit     96T/48T

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人糖基化依賴的細(xì)胞黏附分子(GlyCAM-1)ELISA試劑盒     Human glycosylation-dependent cell adhesion molecule-1, GlyCAM-1 Elisa Kit    96T/48T

人干擾素調(diào)節(jié)因子(IRF)ELISA試劑盒     Human interferon Regulatory Factor, IRF Elisa Kit    96T/48T

人淋巴毒素β(LTB)ELISA試劑盒     Human lymphotoxinβ, LTB Elisa Kit    96T/48T

人淋巴毒素α(LTA)ELISA試劑盒     Human lymphotoxinα, LTA Elisa Kit    96T/48T

人CC趨化因子受體1(CCR1)ELISA試劑盒    Human CC-chemokine receptor 1, CCR1 Elisa Kit    96T/48T

293 [HEK-293] (胚腎細(xì)胞)說(shuō)明書人CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)ELISA試劑盒    Human CX3C-chemokine receptor 1, CX3CR1 Elisa Kit    96T/48T

人肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)ELISA試劑盒     Human pulmonary activation regulated chemokine, PARC Elisa Kit    96T/48T

人黏膜地址素細(xì)胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISA試劑盒    Human mucosal addressin cell adhesion molecule-1, MAdCAM-1 Elisa Kit    96T/48T

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培養(yǎng)操作:

1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;

1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。



產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 293 HEK-293 胚腎細(xì)胞
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