熒光定量PCR試劑盒技術(shù): 產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設有固定桿,固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。 產(chǎn)品名稱 | 牛丘疹性口炎病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Bovine Papular Stomatitis Virus(BPSV) | 貨號 | YSP96469 |
樣品RNA的抽提: ①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質(zhì)量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 溴化亞銅(>98%,BR)PSMB8/LMP7 (1A5) Mouse mAb2,二氨基乙硫酸鹽 無水乙酸銅(>99%,BR)β-Canin (D10A8) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)丁二酸單甲酯(琥珀酸單甲酯) 溴化銅(>99%,BR)MOB1 (E1N9D) Rabbit mAb2-呋喃酸 檸檬酸銅(>98.5%,BR)GABARAP (E1J4E) Rabbit mAb1-辛基-2,二甲基咪唑溴鹽 氫氧化銅(>96.5%,ch Grade)Phospho-Progesrone Receptor (Ser294) Antibody2-溴己酸甲酯 草酸銅(>97%,ch Grade)Toll-like Receptor 2 (E1J2W) Rabbit mAb (Mouse Specific)1-氟環(huán)己 無水硫酸銅(>99%,BR)SignalSlide® PD-L1 IHC Controls(R)-氯-羥基丁 肌酸酐;肌酐Phospho-c-Myc (Ser62) (E1J4K) Rabbit mAb氨基-3,5-二氯甲酸 甲酚紫乙酸鹽(>70%,BS)SignalSlide® LKB1 IHC Controls(2S,3S)-1,2-環(huán)氧-(Boc-氨基)-基丁烷 酸性猩紅7B(>70%,BS)XRN2 (D6L5F) Rabbit mAb2-(2-氨基噻唑-基)乙酸乙酯 酸性紅44(BS)PTMScan® Succinyl-Lysine Motif [Succ-K] Kit2-氯-5-三氟甲基吡啶-甲酸 環(huán)胞甙鹽酸鹽;鹽酸環(huán)胞苷;安西他濱鹽酸鹽PHC1 (1F3F3) Mouse mAb亞硝酸異丁酯 5'-三酸胞苷三鈉鹽Semaphorin 4B Antibody1-甲基引唑-5-酸 細胞松弛素A(>98%,BR)TRIM25 (D9T7G) Rabbit mAb氯磺酰氯 細胞松弛素C(>98%,BR)KISS1R (D9D7C) Rabbit mAb4'-叔丁基-甲氧基二酰 細胞松弛素 D(>98%,BR)Phospho-Rpb1 CTD (Ser7) (E2B6W) Rabbit mAb氯化酰膽鈣鹽 細胞松弛素E(>98%,BR)UFD1 Antibody5-溴-2-羥甲基吡啶 D-樟腦酸(>99%,BR)CDCP1 (D1W9N) Rabbit mAb8-溴-7-羥基喹啉 牛丘疹性口炎病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒甘露糖受體(MR)ELISA試劑盒GSK-3 alpha 葡萄糖合成激酶-3α抗體100 ul 甘露糖凝集素受體(MBLR)ELISA試劑盒Phospho GSK3 alpha (Ser21) 酸化葡萄糖合成激酶3α抗體100 ul 甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集素(MBP/MBL)ELISA試劑盒Phospho-Glycogen synthase 1(Ser641) 酸化葡萄糖合成酶1抗體100 ul 甘露糖(Mannose)ELISA試劑盒GSK-3 Beta (CT) GSK-3β抗體葡萄糖合成激酶-3β抗體1 Kit 甘露聚糖結(jié)合凝集素絲氨酸肽1(C4/C2 RA反應因子的激活因子)(MASP1)ELISA試劑盒GSK-3 Beta (CT) 葡萄糖合成激酶-3β抗體100 ul 甘膽酸(CG)ELISA試劑盒phospho-GSK-3 Beta(Ser9) 酸化葡萄糖合成激酶3β抗體100 ul 甘氨酸ELISA試劑盒phospho-GSK-3 Beta(Thr390) 酸化葡萄糖合成激酶3β抗體5 mg 干細胞因子受體(SCFR)ELISA試劑盒phospho-GSK3 Alpha/Beta(Tyr279+Tyr216) 酸化葡萄糖合成激酶3α/β抗體100 ul 干細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)ELISA試劑盒GSK-3 Beta (NT) 糖原合酶激酶-3β抗體100 ul |