PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 產(chǎn)品名稱 | 莫拉氏菌屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Moraxella spp. | 貨號 | YSP96932 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! ES ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮抑素 96T TP1 英文名稱: 蛋白酪酸酸酶受體TP1抗體 0.2ml CCDC22 英文名稱: 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白22抗體 0.2ml Anti-SEK1/MKK4 原活化蛋白激酶激酶4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml 豬氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒英文名稱:Porcine oxidized lowdensity lipoprotein,OxLDL ELISA Kit* 豬一氧化氮(NO)ELISA試劑盒英文名稱:Porcine nitric oxide,NO ELISA Kit進(jìn)口/分裝 豬胰島素(INS)ELISA試劑盒英文名稱:Porcine Insulin,INS ELISA Kit進(jìn)口/分裝 BRPF3 英文名稱: BRPF3蛋白抗體 0.2ml Anti-RCC1 染色體濃縮調(diào)控蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml NA(Human neuraminidase) ELISA Kit 人神經(jīng)氨酸酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T Anti-NEDD4L/NEDD4-2 泛素連接酶NEDD4-2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml Rhesus antibody Rh IL-6 白介素6 規(guī)格 0.1ml MMP-3 ELISA kit 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶3 96T phospho-PRKCZ(Thr500) 英文名稱: 酸化蛋白激酶C(T500)抗體 0.2ml 大腸桿菌&大腸菌群顯色培養(yǎng)基配套平皿9㎝/塊E.Coli&Coliform Chromogenic Medium Dish TBX培養(yǎng)基1升Tryptone Bile X-glucuronide Agar檢測大腸菌群,大腸菌群培養(yǎng)24小時,顯蘭色 細(xì)菌總數(shù)顯色培養(yǎng)基配套平皿9㎝/塊Total Genes Chromogenic Medium Dish 大腸桿菌O157顯色培養(yǎng)基1升O157 Chromogenic Medium用于大腸桿菌O157菌的顯色培養(yǎng) 250克 大腸桿菌O157顯色培養(yǎng)基配套平皿9㎝/塊O157 Chromogenic Medium Dish 莫拉氏菌屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒B淋巴細(xì)胞白血病/淋巴瘤11/鋅指蛋白856抗體Paxillin/FITC 熒光素標(biāo)記樁蛋白Paxillin抗體IgG100 ug B淋巴細(xì)胞白血病/淋巴瘤11B抗體Phospho-Paxillin (Tyr118)/FITC 熒光素標(biāo)記酸化樁蛋白Paxillin抗體IgG100 ul 鈣平衡調(diào)節(jié)蛋白1抗體PDI/FITC 熒光素標(biāo)記蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶抗體IgG100 ul 阿爾茨海默病淀粉樣蛋白相關(guān)膠原蛋白抗體PDK1/PDPK1/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、3酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體IgG100 ul 老年癡呆相關(guān)類鈣粘蛋白CS1抗體PDK1(phospho Y373 + Y376) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、3酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體IgG300 ul 細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)蛋白NALP3抗體Phospho-PDK1 (Ser241) /FITC 熒光素標(biāo)記酸化3酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體IgG100 ul 豬圓環(huán)病毒Ⅱ型衣殼蛋白抗體Pdk4/FITC 熒光素標(biāo)記丙酮酸脫氫酶激酶4抗體IgG100 ul 血管加壓素激活鈣啟動受體蛋白1抗體Pdx1/FITC 熒光素標(biāo)記胰十二指腸同源異型盒基因抗體IgG100 ul 干細(xì)胞生長因子受體/細(xì)胞表面分化抗原抗體PEA3/FITC 熒光素標(biāo)記多瘤促活化因子抗體IgG300 ul |