熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 念珠狀鏈桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Streptobacillus moniliformis | 貨號 | YSP97220 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團,3'端標(biāo)記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 動物組織活性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒 MBD2 ELISA Kit 100 ul 動物細胞高純內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒 LCMT1(Leucine carboxyl methyltransferase 1) ELISA Kit 5 mg 動物組織高純內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒 DNASE2(Deoxyribonuclease-2-alpha) ELISA Kit 100 ug 通用型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)染色試劑盒 Anti-LAMP2(Anti-lysosomal Associated Membrane Protein 2 Antibody) ELISA Kit 100 ul 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)高質(zhì)染色試劑盒 anti-2019-nCoV(N) IgG ELISA Kit 100 ul 動物組織肌質(zhì)網(wǎng)粗提分離試劑盒 anti-2019-nCoV(N) IgM ELISA Kit 100 ul 動物組織活性肌質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒 FOLR3(Folate receptor gamma) ELISA Kit 300 ul 動物組織高質(zhì)純化肌質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒 CTHRC1(Collagen triple helix repeat-containing protein 1) ELISA Kit 100 ul 動物組織肌質(zhì)網(wǎng)橫小管(T Tube)分離試劑盒 CH25H(Cholesterol 25-hydroxylase) ELISA Kit 1 vial 動物組織肌質(zhì)網(wǎng)三聯(lián)體(TRIAD)分離試劑盒 CAMK2B(Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type II subunit beta) ELISA Kit 100 ug 動物細胞核分離試劑盒 CDCA8(Cell division cycle-associated protein 8) ELISA Kit 100 ul 細胞微管分離試劑盒 MAP4K4 ELISA Kit 100 ug 細胞/組織溶酶體粗提分離試劑盒 MAP4K5 ELISA Kit 100 ul 細胞/組織活性溶酶體分離試劑盒 Matrilin 2 ELISA Kit 100 ul 細胞/組織高質(zhì)純化溶酶體分離試劑盒 MAPK11(Mitogen-activated protein kinase 11) ELISA Kit 100 ul 細胞過氧化酶體分離試劑盒 MAP7 ELISA Kit 20 ul 念珠狀鏈桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒FRMD7蛋白抗體EPO human 促紅細胞生成素100 ul FRMD4A蛋白抗體EPO Receipr human 促紅細胞生成素受體100 ul 延胡索酰酰酸水解酶抗體Fas/Apo-1 human 凋亡相關(guān)因子1 Kit FAM101A蛋白抗體Fas-L human 凋亡相關(guān)因子配體100 ul FAM102B蛋白抗體FGF-4 human 成纖維生長因子-4100 ul FAM104B蛋白抗體FGF-6 human 成纖維生長因子-61 Kit 腎細胞癌下調(diào)蛋白1抗體FGF-6 human 成纖維生長因子-6100 ul 凝血因子8/第八凝血因子/第八因子相關(guān)抗原抗體Flt3 human FMS樣酪氨酸激酶31 Kit 胎盤葉酸受體蛋白2抗體Flt3 Ligand human Flt3 配體100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |