特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 牛莫拉氏菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Moraxella bovis | 貨號(hào) | YSP96928 |
熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺(tái)期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 C20orf160 英文名稱: 20號(hào)染色體開放閱讀框160抗體 0.2ml Anti-CD30/TNFRSF8 CD30抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml Ghrelin(Human) 人腦腸肽Multi-class antibodies規(guī)格:48 Anti-CPT1A 肉毒堿棕櫚?;D(zhuǎn)移酶1A抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml Rhesus antibody Rh NMDAR2B 谷氨酸受體2B抗體 規(guī)格 0.1ml Human dynamin 2,DNM2 ELISA Kit 人發(fā)動(dòng)蛋白2 96T TEM8 英文名稱: 血管內(nèi)皮標(biāo)志物8抗體 0.2ml BRF2 英文名稱: 表皮生長因子反應(yīng)蛋白2抗體 0.2ml Anti-TSFP1/SP1 轉(zhuǎn)錄生長因子SP1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml human phospho-inhibitory subunit of NF-κB Alpha,pIKB Alpha ELISA kit 人酸化核因子κB抑制蛋白α(IKKα human ELISA kit)Multi-class antibodies規(guī)格: 96T Anti-Phospho-SHIP2 (Tyr1135) 酸化蛋白酪氨酸酸酶2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml Rhesus antibody Rh Goat Anti-rat IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 規(guī)格 0.1ml MC Ab(Human melanocyte antibody) ELISA Kit 人黑色素細(xì)胞抗體 96T phospho-NFATC4 (Ser168 + Ser170) 英文名稱: 酸化T細(xì)胞激活核轉(zhuǎn)錄因子4抗體 0.1ml NZM瓊脂100克NZM AgarBR NZM肉湯100克NZM BrothBR NZCYM瓊脂100克NZCYM AgarBR NZCYM肉湯100克NZCYM BrothBR 皰肉牛肉粒100克Dried Meat Particle加入苞肉基礎(chǔ)中配成苞肉培養(yǎng)基 SOB肉湯250克SOB BrothBR 牛莫拉氏菌探針法熒光PCR檢測試劑盒1號(hào)染色體開放閱讀框111抗體PARP/FITC 熒光素標(biāo)記多腺苷二酸多聚酶抗體IgG100 ul 19號(hào)染色體開放閱讀框80抗體Parkin proin/FITC 熒光素標(biāo)記帕金蛋白抗體IgG20 ul 半胱氨酸雙加氧酶1抗體Parvalbumin/FITC 熒光素標(biāo)記微白蛋白/細(xì)小清蛋白抗體IgG100 ul 膠原蛋白11A2抗體PAX1/FITC 熒光素標(biāo)記配對(duì)盒基因1抗體IgG100 ul CUL4B蛋白抗體PAX2/FITC 熒光素標(biāo)記配對(duì)盒基因2抗體IgG20 ul 1號(hào)染色體開放閱讀框103抗體RACK1/FITC 熒光素標(biāo)記受體激活蛋白激酶C1抗體IgG100 ul 凋亡抑制因子2抗體PAX3/FITC 熒光素標(biāo)記配對(duì)盒基因3抗體IgG100 ul 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素結(jié)合蛋白抗體PAX5/FITC 熒光素標(biāo)記配對(duì)盒基因5抗體IgG100 ul 3號(hào)染色體開放閱讀框23抗體PAX7/FITC 熒光素標(biāo)記配對(duì)盒基因7抗體IgG100 ul |