客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計(jì)并合成引物,完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。 產(chǎn)品名稱 | 腦多頭囊蟲(chóng)探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Coenurus cerebralis | 貨號(hào) | YSP96575 |
熒光定量PCR試劑盒技術(shù): 產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開(kāi)了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設(shè)有限位凸起,下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起,兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿,固定桿上通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過(guò)將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分,并將兩個(gè)部分通過(guò)側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。 樣品RNA的抽提: ①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質(zhì)量檢測(cè) 1)紫外吸收法測(cè)定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測(cè)定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 二溴(標(biāo)準(zhǔn)品)DYKDDDDK Tag Antibody (Binds to same epitope as Sigma's Anti-FLAG® M2 Antibody) (Biotinylad)(R)-1-Boc-氨甲基哌啶 氟氯菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=5%,基體:正己烷)MHC Class II (I-A/I-E) (M5/114.15.2) Rat mAb (redFluor™ 710 Conjuga)1-氯甲基-氟-1,二氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷二(四氟酸)鹽 四螨(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.6%)Phospho-(Ser/Thr) ATM/ATR Substra (4F7) Rabbit mAb環(huán)戊基酸 四聚乙(97%)Phospho-Canin δ-1 (Tyr904) Antibody乙基黃原酸鈉 氟菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%)SimpleChIP® Human EIF4G1 Intron 8 Primers己二酸二乙酯 非草隆(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Canin δ-1 (Tyr228) Antibody1-BOC-5-氧代氮雜環(huán)庚烷-甲酸乙酯 脒(標(biāo)準(zhǔn)品)PD-L1 (405.9A11) Mouse mAbN-Boc-羥基氮雜環(huán)丁烷 丁硫溶液(1.00mg/ml)GFP (D5.1) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)氯-DL-氨酸甲酯鹽酸鹽 丁硫溶液(100μg/ml,u=3%)Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb二酸 丁硫溶液(10μg/ml,u=4%)Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb噻唑-2-甲酸 肼(B9)(標(biāo)準(zhǔn)品)Wnt Signaling Antibody Sampler Kit2,6-二甲基嗎啉 避蚊(99%)CDK7 (MO1) Mouse mAb硝酸鎳 標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.00mg/mL,基體:甲)CDK7 (MO1) Mouse mAb四(三基膦)鈀 1,二氯(標(biāo)準(zhǔn)品)Akt (5G3) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2-溴-氟甲 1,2,4,5-四氯(標(biāo)準(zhǔn)品)GIT-1 AntibodyN,N,N'-*基乙二 特丁通(標(biāo)準(zhǔn)品)Akt (pan) (40D4) Mouse mAb1,二氯烷 三乙基錫標(biāo)準(zhǔn)溶液(分析標(biāo)準(zhǔn)品,10ng/μl溶于環(huán)己烷)Cyclin D1 Antibody(三氟甲基)酸 噻呋酰(分析標(biāo)準(zhǔn)品,96%)Phospho-Histone H3 (Ser10) (D7N8E) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)炔基-2-丁酮 腦多頭囊蟲(chóng)探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒牛腎上腺素(EPI)ELISA試劑盒Mtp53(N235K N239Y) 突變型P53抗體100 ul 牛神經(jīng)型一氧化氮合成酶(nNOS/)ELISA試劑盒phospho-P53 (Ser392) 酸化腫瘤抑制基因P53抗體20 ul 牛神經(jīng)肽Y(NPY)ELISA試劑盒p53BP1/53BP1 p53結(jié)合蛋白1抗體100 ul 牛*狀腺原氨酸(T3)ELISA試劑盒phospho-P53 (Ser15) 酸化腫瘤抑制基因P53抗體300 ul 牛軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)ELISA試劑盒phospho-P53 (Ser20) 酸化腫瘤抑制基因P53抗體100 ul 牛脂肪球EGF因子蛋白(MFGE8)ELISA試劑盒phospho-P53 (Ser315) 酸化腫瘤抑制基因P53抗體20 ul 牛酸脫氫酶(LDH)ELISA試劑盒phospho-P53 (Ser33) 酸化腫瘤抑制基因P53抗體100 ul 牛過(guò)氧化物酶(LPO)ELISA試劑盒phospho-P53 (Ser37) 酸化腫瘤抑制基因P53抗體100 ul 牛肉棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-II(CPT-II)ELISA試劑盒phospho-P53 (Ser46) 酸化腫瘤抑制基因P53抗體300 ul 實(shí)驗(yàn)過(guò)程: 一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè) 三、注意事項(xiàng) 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。 2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。 3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。 |