熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 鴨腸炎病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Duck Enteritis Virus | 貨號 | YSP96629 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實(shí)驗(yàn)時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 L-酪氨酸甲酯TRADD Antibody米諾地爾 L-半胱氨酸乙酯鹽酸鹽LIN28A (D84C11) XP® Rabbit mAb二酸單甲酯鹽 L-氨酸乙酯鹽酸鹽GATA-4 (D3A3M) Rabbit mAb2-羥基嘧啶鹽酸鹽 甘氨酸乙酯鹽酸鹽DR5 Antibody2-溴-4'-(三氟甲基)乙酮 L-蛋氨酸乙酯鹽酸鹽;L-甲硫氨酸乙酯鹽酸鹽FLCN (D14G9) Rabbit mAb二氟 L-酪氨酸乙酯鹽酸鹽p27 Kip1 (SX53G8.5) Mouse mAb2-硝基三氟甲 L-天冬氨酸-β-芐酯/L-天冬氨酸-芐酯p27 Kip1 (SX53G8.5) Mouse mAb1,2-二氫-2-異丁氧基喹啉-1-甲酸異丁酯 L-谷氨酸-γ-芐酯MyD88 Antibody甲氧基酸甲酯 L-氨酸芐酯鹽酸鹽β-Actin (8H10D10) Mouse mAb2-巰基煙酸 L-脯氨酸芐酯鹽酸鹽β-Actin (8H10D10) Mouse mAb甲基-5-羥甲基咪唑鹽酸鹽 L-精氨酸-L-谷氨酸鹽TRAIL (C92B9) Rabbit mAb (PE Conjuga)5-羥甲基噻唑 L-精氨酸-α-酮戊二酸鹽(2:1)GRB10 Antibody(二甲氨基)乙縮二甲 S-乙酰半胱氨酸鹽酸Phospho-SHP-2 (Tyr580) Antibody(3AR,4R,5R,6AS)-基六氫-2-氧代-2H-環(huán)戊并[B]呋喃-5-基 [1,1'-聯(lián)]-甲酸酯 O-叔丁基-L-蘇氨酸甲酯鹽酸鹽ZO-3 (D57G7) XP® Rabbit mAb2,二氨基-5-溴吡啶 L-氨酸異酯鹽酸鹽ZO-3 (D57G7) XP® Rabbit mAb甲基-2-并噻唑啉酮腙鹽酸鹽水合物 L-精氨酸叔丁酯TNF-α Antibody氯-硝 L-天冬酰甲酯鹽酸鹽JNK1 (2C6) Mouse mAb2-酸 L-天冬氨酸二叔丁基酯鹽酸鹽TGF-β (56E4) Rabbit mAb硫代嗎啉-1,1-二氧化物 鴨腸炎病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒低密度脂蛋白受體(LDLR)ELISA試劑盒TPA/PLAT 組織型纖溶酶原激活劑抗體100 ul 低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)ELISA試劑盒SUZ12/CHET9 胚胎干細(xì)胞抑制蛋白Suz12抗體100 ul 低密度脂蛋白膽固(LDL-C)ELISA試劑盒SP-A 肺表面活性蛋白A抗體20 ul 低密度脂蛋白(LDL)ELISA試劑盒SPA-1/SIPA-1 信號感應(yīng)增殖相關(guān)蛋白1抗體100 ul 的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA試劑盒SPAG5/map126/Astrin 相關(guān)抗原5抗體100 ul 蛋白酸酶(PP)ELISA試劑盒SPARC 富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白抗體100 ul 蛋白聚糖4(PRG4)ELISA試劑盒SP-B 肺表面活性蛋白B抗體20 ul 蛋白激酶G(PKG)ELISA試劑盒SP-D 肺表面活性蛋白D抗體100 ul 蛋白激酶C(PKC)ELISA試劑盒Spectrin-Alpha 血影蛋白/收縮蛋白抗體100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |