PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 產(chǎn)品名稱 | 伴放線放線桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Actinobacillus actinomycetemcomitans | 貨號 | YSP96334 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 吉非替尼C24H34O4乙烯基*基硅烷 吉非替尼(標準品)C27H32O16乙基三乙氧基硅烷 鹽酸吉西他濱C20H20O45-溴-2-甲酸甲酯 鹽酸吉西他濱(標準品)C19H20O65-氯-2-苯基-3H-咪唑-甲 甲磺酸吉米沙星C30H26O132,6-二氯苯甲酰胺 甲磺酸吉米沙星(標準品)C51H84O22間羥基苯酮 膽酸鈉C20H26O4氨基-三氟甲苯 醋酸胰高血糖素C15H20O3氟-2-羥基苯甲 醋酸戈那瑞林C28H44O38-氨基萘磺酸 鹽酸格拉司瓊C16H20O9氯-5-甲氧基苯胺 鹽酸格拉司瓊(標準品)C16H12O4氨基-5-氯-2-乙氧基苯甲酸 氫氯噻C54H92O23坎利酮 氫氯噻(標準品)C53H90O222,5-二磺酰氯 醋酸C53H90O22溴-2-胺 醋酸(標準品)C42H72O142-氯-氟 鹽酸伊達比星C42H72O13乙酰酮鋅(無水) 甲磺酸伊馬替尼C36H62O9吲哚-羧酸 甲磺酸伊馬替尼(標準品)C20H24NO42-異基-6-甲基-吡啶 伴放線放線桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒豬B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA試劑盒phospho-ADRB2(Ser346) 磷酸化腎上腺素能受體β2抗體100 ul 豬Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA試劑盒ADRB3 β3-腎上腺素能受體抗體100 ul 豬Apelin(APLN)ELISA試劑盒AE3/SLC4A3 陰離子交換蛋白3抗體1 Kit 豬5羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒AEBP1 脂肪細胞增強結(jié)合蛋白1100 ul 豬Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒AF6/Afadin 絲狀肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體100 ul 豬Ⅲ型前膠原氨基末端肽(PⅢNP)ELISA試劑盒phospho-Afadin(Ser1718) 磷酸化絲狀肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體100 ul 豬Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)ELISA試劑盒alpha-L-arabinofuranosidase 果桃α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗體100 ul 豬Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA試劑盒AFP 甲胎蛋白抗體100 ul 豬25羥基維生素D3(25 HVD3)ELISA試劑盒AFP 甲胎蛋白單克隆抗體(包被)100 ul |