微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

產(chǎn)品名稱：頂青霉
貨號：YS-01J13443
拉丁文: Penicillium corylophilum

分離基物: 雙望分劃鏡

提供形式: 凍干物

安全等級: 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 光學(xué)儀器生霉試驗菌；纖維素酶

培養(yǎng)基: 綜合PDA：20%馬鈴薯汁1L，葡萄糖20g ，KH2PO4 3g， MgSO4.7H2O 1.5g，硫胺素微量，瓊脂 15g，pH 自然。

生長條件: 25-28℃，好氧

存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

公司產(chǎn)品僅用于科研培養(yǎng)及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長

4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物培養(yǎng)方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。

上述兩種方法雖然都可以實現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對菌落計數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復(fù)雜，對平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴展，使之分布均勻。

兔細絲蛋白A(FLNα)骨抑制素，人磷酸肌磷脂酶PLCZ1抗體

兔肝臟/紅酮酸激酶(PK)骨抑制素（1-5）酰，人，，狗，大鼠，小鼠，兔，馬磷脂酸磷酸酶2b抗體

兔白血病抑制因子(LIF)骨抑制素酰，人磷酸化端粒酶結(jié)合蛋白P23抗體

兔氧化低密度脂蛋白(OxLDL)p60 v-結(jié)構(gòu)域（137-157）磷酸二酯酶5A抗體

兔叢生蛋白(CLU)p60 C-結(jié)構(gòu)域底物ⅠLys(生物素)節(jié)律抑制蛋白PER1抗體

兔粒趨化蛋白2(GCP-2)垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽-27，人，小鼠，綿羊，豬，大鼠節(jié)律蛋白2抗體

兔中間α球蛋白抑制因子H4(ITIH4)垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽-27（6-27），人，雞，小鼠，豬，大鼠線粒體蛋白酪氨酸磷酸酶1抗體

兔C-肽(C-P)垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38（16-38），人，雞，小鼠，綿羊，豬，大鼠蛋白酶體復(fù)合物C5抗體

兔補體因子D(CFD) 垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽相關(guān)肽（1-29），大鼠重組豬乙腦病結(jié)構(gòu)蛋白抗體

兔普列克底物蛋白同源物樣結(jié)構(gòu)域家族A成員2(PHLDA2)胰多肽，人磷酸甲羥戊酸激酶抗體

兔微管蛋白α3C(TUBα3C)胰多肽，大鼠Phocein蛋白抗體

兔γ1肌動蛋白(ACTG1)甲狀旁腺激素（1-38），人蛋白酶體PSMα4/20S Proteasome α4抗體

兔腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子(TSGF)五肽胃泌素朊病/感染性蛋白抗體

兔過氧化還原酶5(PRDX5)肽YY，人4-磷酸磷脂酰肌5激酶1樣蛋白抗體

兔半胱氨酸蛋白酶抑制劑(CSTA)肽YY，犬，大鼠，小鼠，豬磷酸化磷脂酰肌激酶PIK3-γ抗體

兔嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素D(CYPD)  磷脂酶A2激活肽B淋巴白血病前體蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體
頂青霉規(guī)格污黑腐皮殼特異性核苷酸果糖β抗體

蠟樣芽孢桿菌11號染色體開放閱讀框73抗體

類諾卡氏菌屬磷酸乙轉(zhuǎn)移酶A抗體

多粘類芽胞桿菌前列環(huán)素受體抗體

釀酒酵母原鈣粘蛋白7抗體

大腸埃希菌過氧化物酶膜蛋白1抗體

釀酒酵母橋粒斑菲素蛋白2抗體

鏈格孢屬胞粘蛋白結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白抗體