熒光染料的優(yōu)點: 產品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產品名稱 | 都柏林沙門氏菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Salmonella dublin | 貨號 | YSP97154 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數與PCR產物的數量成正比,因此,根據PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化。而在平臺期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數。只有在熒光信號指數擴增階段, PCR產物量的對數值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 蛛毒素受體1(LPHN1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 球毛殼 5g Leupaxin蛋白(LPXN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 大腸埃希菌 100g 溶血脂酶Ⅰ(LYPLA1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 皺紋假單胞菌 1g 脲酰丙酸酶β(UPβ1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 香菇屬(大斗菇) 25g 尿溶蛋白1A(UPK1A)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 釀酒酵母 5g 犁鼻1受體1(VN1R1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 細鏈格孢 100g 木糖基轉移酶Ⅱ(XYLT2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 蠟樣芽胞桿菌 (蠟狀芽胞桿菌) 25g 家族性地中海熱基因(MEFV)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 沙福芽孢桿菌 500g 線粒體融合素1(MFN1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 頭狀葡萄球菌 1g Midline 1蛋白(MID1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 土生類諾卡氏菌 5g 巰基丙酮酸硫轉移酶(MPST)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ≥99% 草花忍冬葉點霉 5MG 肌蛋白(MSC)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 95% 丙氨菌素鏈霉菌 1g Metaxin 1蛋白(MTX1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 95% 大腸埃希氏菌 5g 黑素皮質激素3受體(MC3R)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 96% 釀酒酵母 1g 肌收縮蛋白(MYOT)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 96% 土曲霉 25g 肌微管素1(MTM1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 96% 長枝木霉 5g 神經元導向因子1(NAV1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 凍土毛霉 100g 神經軟骨蛋白(NCDN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 釀酒酵母 25g 都柏林沙門氏菌探針法熒光PCR檢測試劑盒遺傳性前列腺癌蛋白2抗體Mfn1 (Mitofusin1) 線粒體融合蛋白1100 ul 酸化絲裂原活化蛋白激酶1抗體MT(metallothionein) 金屬硫蛋白抗原20 ul 酸化絲裂原活化蛋白激酶1抗體MGr1-Ag/37LRP(P37-kDa laminin receptor precursor) 層粘連蛋白受體1抗體1 Kit 酸化絲裂原活化蛋白激酶1抗體MGr1-Ag/37LRP(P37-kDa laminin receptor precursor)(CT) 層粘連蛋白受體1抗原(C端)100µl 染色體區(qū)域穩(wěn)定蛋白/核輸出蛋白1/染色體區(qū)域穩(wěn)定必需蛋白抗體MK(Midkine) 中期因子/肝素結合生長因子抗原1 Kit 上皮細胞微管相關蛋白7抗體MLC/Myosin light chain 3 peptide 肌球蛋白輕鏈3抗原100 ul 性鞘脂酶7抗體MIF (Macrophage Migration Inhibitory Factor) 巨噬細胞移動抑制因子抗原500 ul 表皮生長因子樣重復折疊1結構域蛋白3抗體MIP-1 Beta (macrophage inflammatory proin 1 Beta) 巨噬細胞炎癥因子1β 抗原1 Kit 長鏈脂肪酸延長酶長ELOVL6抗體CD122/IL-2RB(Imrleukm-2 Receptor beta) CD122/白介素2受體β鏈抗原1 Kit PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的,隨著反應循環(huán)數的增加,終PCR反應不再以指數形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據終的PCR產物量不能計算出初始模板量。 |