特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 唇飾帶線蟲探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Cheilospirura hamulosa | 貨號(hào) | YSP96532 |
熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測(cè),縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺(tái)期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 1,1,2,2-四氯乙烷標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.92mg/ml,基體:甲)AE1/SLC4A1 (D3X1R) Rabbit mAb2-(哌啶基)-2- 1,1,2,2-四氯乙烷(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-SirT1 (Ser27) Antibody異喹啉-甲 二硫化碳(for GC,≥99.9%)PAR-4 Antibody2-(1-咪唑基)乙酸 二硫化碳(AR,99.0%)Merlin/Ezrin/Radixin/Moesin (D1P8I) Rabbit mAb2-羥基-1-萘甲酸 環(huán)戊烷(for HPLC,農(nóng)殘級(jí),≥75%(GC))Phospho-PAR-4 (Thr163) Antibody5-甲基水楊酸甲酯 氯代異烷(標(biāo)準(zhǔn)品)Raf Family Antibody Sampler Kit2,6-二氯氟 氯-酚(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-eEF2 (Thr56) Antibody2-硝基-(三氟甲氧基) 氯-2-(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.7%(HPLC))FGF Receptor 2 (D4L2V) Rabbit mAb3,5-二氟 氯酚(標(biāo)準(zhǔn)品)eEF2 Antibody(±)-BOC-A-膦?;拾彼?酯 氯標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:甲)Progesrone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)2,5-二甲基 氯-(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)溴磺 氯-氟(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-硝基-5-溴 屈(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-MEK1/2 (Ser221) (166F8) Rabbit mAb5-氯-2-甲氧基酸 屈標(biāo)準(zhǔn)溶液(3.58 μg/mL,基體:甲)Phospho-MEK1/2 (Ser221) (166F8) Rabbit mAb2,二氟 鄰氯甲(標(biāo)準(zhǔn)品)p38β MAPK (C28C2) Rabbit mAb異硫酸異酯 鄰甲酚(用于環(huán)境分析)p38β MAPK (C28C2) Rabbit mAb2,5-二氯嘧啶 對(duì)甲酚(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1387) (D2R3A) Rabbit mAb2-氯-5-甲氧基嘧啶 氫化鈣(AR,95%)Phospho-Chk1 (Ser345) Antibody2-氯-甲氧基嘧啶 唇飾帶線蟲探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒Q熱科克斯體1(Q fever)抗體(IgG)ELISA試劑盒MAG-a/L-MAG 髓鞘相關(guān)糖蛋白-a抗體100 ul Q熱科克斯體1(Q fever)抗體(IgA)ELISA試劑盒MAGE-1 黑色素瘤相關(guān)抗原抗體20 ul P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISA試劑盒MAGE-A4 黑色素瘤相關(guān)抗原4抗體100 ul P物質(zhì)受體(SP-R)ELISA試劑盒MAP1LC3A 自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體100 ul p物質(zhì)(SP)ELISA試劑盒MO25 alpha/CAB39 鈣結(jié)合蛋白39抗體100 ul P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白(P-cad)ELISA試劑盒Mesothelioma 間質(zhì)細(xì)胞蛋白抗體100 ul Prominin 2(PROM2)ELISA試劑盒TORC1/CRTC1 環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體100 ul Podocin ELISA試劑盒Phospho-Torc1/Crtc1 (Ser151) 酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體100 ul PL7抗體/抗蘇氨酰tRNA合成酶(PL7)ELISA試劑盒MAP3K8/TPL2 絲裂原活化蛋白激酶激酶8抗體100µl |