特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 鄰單胞菌通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Pleisiomonas spp. | 貨號 | YSP97081 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團,3'端標(biāo)記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 肝細胞生長因子受體(HGFR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 釀酒酵母 5g 二氫乳清酸脫氫酶(DHODH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 蠟樣芽孢桿菌 100mg 精氨酸加壓素原(VP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 禽白血病病毒 50mg 白介素5受體α(IL5Rα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 淡紫青霉 1g 應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白1(STIP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 印度芽孢桿菌 1g 硬脂酰輔酶A去飽和酶(SCD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 洋蔥伯克霍爾德氏菌 25g 成纖維細胞生長因子21(FGF21)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 絨毛栓菌 5g 補體成分4d(C4d)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 丙酮丁醇梭菌 100g 激肽釋放酶6(KLK6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 中華根瘤菌 25g 嗜鉻蛋白B(CHGB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 血紅擬革蓋菌 500g 胰島素樣生長因子酸不穩(wěn)定亞基(IGFALS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 高溫金針菇 25g 血管緊張素Ⅱ(ANGⅡ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 紡織品 纖維含量(棉與莫代爾纖維) 5g 雙特異性酸酶6(DUSP6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98% 黃曲霉 1g Nodal同源物(NODAL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98% 釀酒酵母 25g Nei內(nèi)切核酸酶Ⅷ樣蛋白1(NEIL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98% 枯草芽孢桿菌 5g 黑素瘤細胞黏附分子(MCAM)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 枯草芽孢桿菌 25g 轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 發(fā)酵乳桿菌(現(xiàn)貨) 5g Dicer酶1(DICER1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 單核細胞增生利斯特菌 100g 鄰單胞菌通用探針法熒光PCR檢測試劑盒氧化環(huán)化酶1抗體Ah Receptor(Aryl Hydrocarbon Receptor) 芳香烴受體抗原100µl Ⅰ型膠原抗體Fe65 proin peptide Fe65 蛋白(多肽抗原)100 ul Ⅴ型膠原抗體FGF1 (aFGF )(ECGF-beta)(HBGF-1) 肝素結(jié)合生長因子( 酸性成纖維細胞生長因子)(多肽片斷抗原)100 ul Ⅹ型膠原抗體ECG2 (sophagus cancer-relad gene-2) 食道癌相關(guān)基因(抗原)20 ul 周期素F抗體fgL2 (Fibrinogen-like 2) 凝血酶原酶 (又稱:纖維介素蛋白;前凝血素)100 ul 泛素連接酶CUL7蛋白抗體FLIP S/L peptide 凋亡調(diào)節(jié)基因之一(多肽抗原)100 ul 甲狀腺受體相互作用蛋白15抗體FoxP3 叉頭蛋白3-T細胞轉(zhuǎn)錄因子(多肽抗原)1Kit 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基6抗體GAD-65 (glutama decarboxylase) 谷氨酸脫羧酶-65(抗原)500 ul 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基4抗體GAP-43 ( Growth associad proin-43 ) 生長相關(guān)蛋白-43(抗原)100 ul |