熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 伯氏疏螺旋體探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Borrelia burgdorferi | 貨號 | YSP96453 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 三氧化二鉻(>99%,BR)CD71 (D7G9X) XP® Rabbit mAb溴-2-硝基三氟 四氧化三鈷(>99%,BR)CD71 (D7G9X) XP® Rabbit mAb甲酸乙酯 乙酸鈷四水(>99.5%,BR)UVRAG (D2Q1Z) Rabbit mAb甲酰-2-酸乙酯 鈷粉(>99%,BR)N-Cadherin (D4R1H) XP® Rabbit mAb氧基甲酸 銅粉(>99.5%,BR)N-Cadherin (D4R1H) XP® Rabbit mAb2-甲基-5-磺酰氯 式碳酸銅(銅純度:52.5~56.5%)LC3A/B (D3U4C) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2-氟 氧化銅粉(>99%,BR)LSm2 (D9X6C) Rabbit mAb十二烷基噻吩 焦銅iNOS (D6B6S) Rabbit mAb2,二羥基-甲 銅三水(>98%,BR)Phospho-SQSTM1/p62 (Thr269/Ser272) Antibody5-溴-甲基-1H-吲唑 2'-脫氧腺苷5'二酸三鈉鹽(>97%,BR)PFKFB3 (D7H4Q) Rabbit mAb乙酰基-7(1H)-氮雜吲哚 2'-脫氧胞苷-5'-二酸三鈉鹽(分子生物學(xué)級)PathScan® Phospho-HER4/ErbB4 (panTyr) Sandwich ELISA Kit2-溴-1,二氯-5-氟 (>98%,BR)IFITM1 Antibody乙酸 DMPPathScan® Total HIF-1α Sandwich ELISA Kit8-硝基喹啉 沒食子酸月桂酯(>98.5%,BR)Phospho-FoxO3a (Ser253) (D18H8) Rabbit mAb氨基-5-氯三氟甲 dUMP;2'-脫氧尿苷-5'-酸二鈉鹽MT1-MMP (D1E4) Rabbit mAb2-溴-6-氯并噻唑 乙鹽酸鹽(>98%,BR)MMP-2 (D8N9Y) Rabbit mAb1-己基-2,二甲基咪唑三氟甲磺酸鹽 呋喃三二鈉鹽TRF2 (D1Y5D) Rabbit mAb芐基二膦 吲哚基-beta-D-吡喃葡萄糖苷(>98%,BR)SignalSilence® IRF-7 siRNA I5-溴-2-甲氧基甲 伯氏疏螺旋體探針法熒光PCR檢測試劑盒環(huán)酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒TBX2/T-box2 血栓素B2抗體(一種新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因)100 ul 環(huán)酸鳥苷(cGMP)ELISA試劑盒FSH receptor 促卵泡刺激素受體抗體100 ul 環(huán)加氧酶2(COX-2)ELISA試劑盒Follistatin 卵泡抑素抗體100 ul 踝蛋白(talin)ELISA試劑盒FSP/Spastin 纖維母細(xì)胞表面蛋白抗體100 ul 花生四酸5脂氧合酶(ALOX5/LOG5)ELISA試劑盒FSH 促卵泡刺激素抗體100 ul 花生四酸15脂加氧酶(ALOX15/LOG15)ELISA試劑盒FHIT 脆性組氨酸三聯(lián)體抗體20 ul 花生四酸12 - 脂氧合酶,12S型(ALOX12/LOG12)ELISA試劑盒Phospho-FHIT (Tyr114) 酸化脆性組氨酸三聯(lián)體抗體500 ul 花生四酸(AA)ELISA試劑盒G proin beta subunit GI G蛋白/鳥苷酸結(jié)合蛋白抗體100 ul 琥珀酰輔酶A合成酶(SCS)ELISA試劑盒SLK/Fyn 酪氨酸蛋白激酶Fyn(同步原癌基因)抗體1 Kit PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |