特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 山羊皰疹病毒通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Caprine Herpesvirus(CpHV) | 貨號 | YSP96524 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團,3'端標(biāo)記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 仲丁(Standard for GC,≥99.8%(GC))Mnk1 (C4C1) Rabbit mAb(R)-1,2- 聯(lián)(Standard for GC,>99.5%(GC))ESET (C1C12) Rabbit mAb4,二甲基環(huán)己酮 1,丁二(BDO)(standard for GC,≥99%(GC))ESET (C1C12) Rabbit mAb6-氯尿嘧啶 正丁酸(Standard for GC,>99.5%(GC))Phospho-Chk2 (Thr68) (C13C1) Rabbit mAb叔丁基馬來酸酯 正丁(Standard for GC,≥99.7%(GC))Phospho-Chk2 (Thr68) (C13C1) Rabbit mAb2-環(huán)戊基-2-羥基 (Standard for GC)RPA70/RPA1 (4D9) Rat mAb4,6-二氯-1H-吡唑并[3,C]嘧啶 甲酸丁酯(Standard for GC, ≥99.5% (GC))MRPL11 Antibody溴-氯甲酸 二乙二丁(standard for GC,≥99.5%(GC))Etoposide2-(甲?;?- 甲基酸丁酯(Standard for GC,>99.5%(GC))Naked1 (C30F10) Rabbit mAb2-溴-4甲基芐 酸叔丁酯(standard for GC,≥99.5%(GC)Naked1 (C30F10) Rabbit mAb溴-甲 己酸丁酯(standard for GC,≥99.5%(GC))Caspase-12 Antibody2-溴-5- 2-丁酮(Standard for GC, ≥99.9% (GC))Caspase-12 Antibody2-氨基-甲氧基甲酸 戊酸丁酯(Standard for GC, ≥99.5% (GC))TCF1/TCF7 (C63D9) Rabbit mAb氯-6-甲氧基喹啉 (standard for GC,≥99.9%(GC))TCF1/TCF7 (C63D9) Rabbit mAb溴-1,1,1-三氟酮 乙酸丁酯(standard for GC,≥99.7%(GC))Borzomib4,6-二氯-5-甲基嘧啶 1,2,丁三(BT)(standard for GC,≥99.5%(GC))Jagged2 (C83A8) Rabbit mAb對二三氟甲 間氯(standard for GC,>99.5%(GC))TCF1/TCF7 (C46C7) Rabbit mAb氟-5-溴酚 環(huán)己烷(Standard for GC,≥99.9%(GC))Shh (C9C5) Rabbit mAb1,2-雙(三氟甲基) 山羊皰疹病毒通用探針法熒光PCR檢測試劑盒αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)ELISA試劑盒LIFR/CD118 白血病抑制因子受體抗體100 ul α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA試劑盒Lingo-1 Nogo受體反應(yīng)蛋白抗體1 Kit α2巨球蛋白(α2-MG)ELISA試劑盒LIMK1 單絲氨酸蛋白激酶1抗體100 ul α2-HS糖蛋白(AHSG)抗體ELISA試劑盒Phospho-LIMK1 (Thr508)/LIMK2 (Thr505) 酸化單絲氨酸蛋白激酶1/2抗體100 ul α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)ELISA試劑盒LIR-6 白細胞免疫球蛋白樣受體6抗體100µl α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒LIR-8/CD85c/LILRB5 白細胞免疫球蛋白樣受體8抗體500 ul α1抗胰糜蛋白酶(AACT)ELISA試劑盒LIS1 無腦回的致病基因LIS1抗體100 ul α1抗胰蛋白酶(α1-AT)ELISA試劑盒LILRB3/CD85a/PirB 白細胞免疫球蛋白樣受體-B抗體20 ul α1防御素(DEFA1)ELISA試劑盒LIX1 LIX1抗體5 mg |