PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩?lái)說(shuō)，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái)，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過熔解曲線檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來(lái)也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
他唑巴坦鈉 (標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Bad (Ser112) Blocking Peptide1-芐基-5-氧-吡咯烷羧酸甲酯

D-環(huán)絲氨酸Phospho-GSK-3α (Ser21) Blocking Peptide反式乙

D-環(huán)絲氨酸(標(biāo)準(zhǔn)品)CD38 (HIT2) Mouse mAb (PerCP-Cy5.5® Conjuga)氯-甲酸

鹽酸四環(huán)素IDO (D5J4E™) Rabbit mAb (PE Conjuga)硝基鄰二

鹽酸四環(huán)素(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)氯乙

嘌呤霉素Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)氯喹唑啉

素鈉/羧芐西林鈉β-Tubulin Blocking Peptide2-甲基-5-嘧啶甲酸

羧芐西林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)Cytochrome c Blocking Peptide2-溴-噻唑羧酸

芬達(dá)唑；硫咪唑COX IV Blocking Peptide2-氨基-5-氯

芬達(dá)唑；硫咪唑(標(biāo)準(zhǔn)品)Mre11 Blocking Peptide溴-2-氯吡啶

氯前列鈉(D型）PU.1 Blocking Peptide氟-5-

氯前列鈉(DL型）Survivin Blocking Peptide9,10-二溴蒽

鹽酸川芎(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Stat1 (Tyr701) Blocking Peptide2-肼基甲酸鹽酸鹽

鹽酸川芎Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit6-溴吲哚

頭孢氨芐Jak2 Blocking Peptide(1,二氧戊環(huán)-2-基)甲基三基溴化瞵

頭孢氨芐(標(biāo)準(zhǔn)品)Bim (C34C5) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)鄰氟乙

赤霉素GA3GITR (D5V7P) Rabbit mAbN-芐基-氧代哌啶-羧酸乙酯鹽酸鹽

氯霉素HDAC6 (D2E5) Rabbit mAb (PE Conjuga)羥基-甲氧基
莫氏巴貝斯蟲探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISA試劑盒Cortactin  皮層肌動(dòng)蛋白抗體100 ul

P物質(zhì)受體(SP-R)ELISA試劑盒phospho-Cortactin (Tyr466)  酸化皮層肌動(dòng)蛋白抗體100 ul

P物質(zhì)(SP)ELISA試劑盒Claudin 5  緊密連接蛋白5抗體100 ul

P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)ELISA試劑盒Claudin-11  少突膠質(zhì)細(xì)胞跨膜蛋白抗體100 ul

p53(p53)ELISA試劑盒Claudin 1  緊密連接蛋白1抗體(C端)20 ul

opiorphin ELISA試劑盒COMP/EPD1  軟骨寡聚基質(zhì)蛋白抗體1 Kit

N-乙酰基-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯氨酸(AcSDKP)ELISA試劑盒COX1  氧化環(huán)化酶1抗體100 ul

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒Cyclooxygenase 2/COX2  過氧化物合成酶2抗體100 ul

N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA試劑盒CDX2  尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2抗體100 ul