特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 毛樣枝孢霉探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Cladosporium trichoides | 貨號 | YSP96553 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 四甲基硫酸氫銨(離子色譜級,≥99.0%(T))PAK3 Antibody羥基磺酸鈉 三乙(LC-MS淋洗劑,≥99.5%(GC))PAK3 Antibody代叔丁烷 四乙基溴化銨(離子對色譜級)PTMScan® Glutaryl-Lysine [Glut-K] Kit6,6'-二甲基-2,2'-聯(lián)吡啶 四丁基化銨(離子對色譜級)PRAS40 Antibody乙二乙醋酸酯 三辛(離子對試劑)Phospho-PRK1 (Thr774)/PRK2 (Thr816) Antibody5-甲基異噁唑-酰氨 甲酸鈉(for HPLC,≥99.0%(NT))PRK2 Antibody4,5-二氨基-6-巰基嘧啶 1-己烷磺酸鈉(離子對色譜級,>98.0%(T))HP1β Antibody2-溴乙酰 高氯酸鈉,無水(for HPLC,99.0%)Pan-Calcineurin A Antibody氟磺?;柞?/span> 四甲基溴化銨(離子對色譜級,≥99.0%(AT))PAK2 (C17A10) Rabbit mAb三氟 三溴(光譜級,>99.0%(GC))PAK2 (C17A10) Rabbit mAb3,二氯 草酸鈉容量分析用溶液標準物質(0.05M)HP1α Antibody對甲氧基甲酸乙酯 氫氧化鈉容量分析用標準溶液(0.0997mol/L)eIF4G (C65H5) Rabbit mAb三羥甲基氨烷馬來酸酯 剛果紅(分析標準品,≥97.0%(HPLC))HP1γ Antibody(2S,5S)-2,5-己二 正癸酸(分析標準品,≥99.5%(GC))Jagged1 (28H8) Rabbit mAb并[B]噻吩-乙酸 異丁酸(分析標準品,>99.5%(GC))Jagged1 (28H8) Rabbit mAb2-(1H-吡唑-1-基)乙酸 甲基反亞油酸甲酯(分析標準品)CD161/KLRB1 (HP-3G10) Mouse mAb (PerCP-Cy5.5® Conjuga)N-BOC-L-1,2,3,四氫異喹啉-羧酸 肉豆蔻酸甲酯(分析標準品,≥99.5%(GC))JMJD1B/JHDM2B Antibody2-氨基-5-溴甲酰 三聚(分析標準品,≥99.9%(HPLC))GST Antibody5-溴-2-氟三氟甲 毛樣枝孢霉探針法熒光PCR檢測試劑盒8異(8-iso-PG)ELISA試劑盒NEDD4L/NEDD4-2 泛素連接酶NEDD4-2抗體100 ul 8-異構F2α(8-epi-PGF2α)ELISA試劑盒Phospho-NEDD4L (Ser342) 酸化泛素連接酶NEDD4-2抗體100 ul 8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA試劑盒NCoR2 核受體輔助抑制因子2抗體100 ul 8-羥基鳥嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)ELISA試劑盒NEP/MME 金屬肽鏈內切酶抗體100 ul 6酮F1a(6-keto-PGF1a)ELISA試劑盒NDRG1/Cap43 分化相關基因NDRG1抗體100 ul 6酮(6-K-PG)ELISA試劑盒Phospho-NDRG1 (Ser330) 酸化分化相關基因NDRG1抗體100 ul 6-羥多巴(6-OHDA)ELISA試劑盒Phospho-NDRG1 (Thr346) 酸化分化相關基因NDRG1抗體20 ul 60S核糖體蛋白L36a-樣(RPL36AL)ELISA試劑盒NDRG2 抑癌基因NDRG2抗體100 ul 60S核糖體蛋白L17(RPL17)ELISA試劑盒NDRG3 抑癌基因NDRG3抗體100 ul |