特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 埃希氏菌通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Escherichia spp. | 貨號 | YSP96700 |
熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實(shí)驗(yàn)時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 氨芬酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)HER4/ErbB4 (111B2) Rabbit mAb2-氟-6-甲氧基 地塞米松環(huán)氧水解物HER4/ErbB4 (111B2) Rabbit mAbN-基馬來酰亞 2,6-二叔丁基對甲酚,丁基羥, 抗氧劑 BHT Clathrin Heavy Chain (D3C6) XP® Rabbit mAb硝酸釓 甲基潑尼松Clathrin Heavy Chain (D3C6) XP® Rabbit mAb甲基酸頻哪酯 甲基潑尼松(標(biāo)準(zhǔn)品)TNFRSF17/BCMA Antibody對叔丁基乙酮 阿普斯特;CC10004RalA (D6G8) Rabbit mAbS-基丁氨酸 L-(-)-葡萄糖(標(biāo)準(zhǔn)品)RIP3 (D4G2A) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-溴-5-氟甲 7-酮基去氫表雄酮SMC1 Antibody2-氟-甲氧基 硝酸銣Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)鄰三氟甲氧基甲 CHIR-99021 (CT99021.HCl)SQSTM1/p62-like Receptor Antibody Sampler Kit鄰氨基乙 氯-3,5-二甲酚,對氯間二甲酚DCBLD2 AntibodyFmoc-2-氨基異丁酸 駱駝蓬;駱駝蓬靈;哈梅靈(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-SMC1 (Ser957) (5D11G5) Mouse mAb2-基吲哚 阿卡地新(AICAR)Phospho-NF-κB p105 (Ser933) (18E6) Rabbit mAb吉西他濱 蒲公英萜;蒲公英賽(標(biāo)準(zhǔn)品)Stat5a (4H1) Mouse mAb并噻吩 琥珀酸普卡必利Phospho-NF-κB p105 (Ser933) (178F3) Rabbit mAb (IHC Specific)5-硝基 鹽酸納洛酮Phospho-NF-κB2 p100 (Ser866/870) Antibody3,4,5-*氧基 硝酸布康唑Phospho-NF-κB2 p100 (Ser866/870) Antibody[1,1'-雙(二基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯絡(luò)合物 NVP-BKM120Phospho-NF-κB2 p100 (Ser866/870) Antibody2-氟甲 埃希氏菌通用探針法熒光PCR檢測試劑盒鴨抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISA試劑盒ATR/ACTR(phospho Ser428) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、ATR抗體IgG20 ul 鴨極低密度脂蛋白(VLDL)ELISA試劑盒ATF2/FITC 熒光素標(biāo)記活化復(fù)制因子2抗體IgG100 ul 鴨環(huán)酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒phospho-ATF2(Thr69/71) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、、猴酸化活化復(fù)制因子2(phospho ATF 2)抗體IgG100 ul 鴨環(huán)酸鳥苷(cGMP)ELISA試劑盒ATF3/FITC 熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體IgG100 ul 鴨白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒ATF4/FITC 熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子4抗體IgG100 ul 鴨白介素6(IL-6)ELISA試劑盒ATF6/FITC 熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子6抗體IgG100 ul 鴨白介素4(IL-4)ELISA試劑盒ATG1/ULK1/FITC 熒光素標(biāo)記自噬相關(guān)蛋白1抗體IgG20 ul 鴨白介素2(IL-2)ELISA試劑盒ATG7/FITC 熒光素標(biāo)記自噬相關(guān)蛋白7抗體IgG100 ul 鴨白介素1(IL-1)ELISA試劑盒thrombin II /FITC 熒光素標(biāo)記凝血酶Ⅱ抗體IgG100 ul |