特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 鯉皰疹病毒3型探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Cyprinid Herpesvirus(CyHV-III ) | 貨號 | YSP96608 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團,3'端標(biāo)記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 NAM [=N-(9-吖啶基)馬來酰亞](>98.0%(HPLC))TCF8/ZEB1 (D80D3) Rabbit mAb十二烷基磺酸 2,萘二(>99.0%(GC))SHP-2 (D50F2) Rabbit mAb硝酸異辛酯 DBD-F [=(N,N-二甲氨基磺酰)-7-氟-2,1,并惡二唑](>98.0%(HPLC))SHP-2 (D50F2) Rabbit mAb氮雜吲唑 N-(1-芘基)馬來酰亞(>97.0%(HPLC))Phospho-eIF2α (Ser51) (D9G8) XP® Rabbit mAb2,1,并噻二唑 愛維莫潘Phospho-eIF2α (Ser51) (D9G8) XP® Rabbit mAb二基硫代乙酰鹽酸鹽 磺炳基十四烷基二甲甜菜Phospho-M-CSF Receptor (Tyr699) Antibody1-乙氧基-1-*硅氧基環(huán)烷 磺炳基十六烷基二甲甜菜GFAP (E6N9L) Mouse mAb2-氯吡-羧酸 聚氧乙月桂(Brij-35);Brij™ L23Myc-Tag (9B11) Mouse mAb (Sepharose® Bead Conjuga)(三氟甲基) 十二烷基硫酸鋰Phospho-DARPP-32 (Ser97) (D11A5) Rabbit mAb3,5-二甲基芐基氯 諾納德® P-40Myosin Va Antibody2-甲氧基-氨基甲酸甲酯 硫代甜菜 8Myosin IIa Antibody駢三氮唑 99.8% 硫代甜菜 10Myosin IIa Antibody1-氨基-1-環(huán)己酸 硫代甜菜 12Myosin IIb Antibody1-芐基哌 恩他卡朋;COMT抑制劑PI3 Kinase p110 δ (D1Q7R) Rabbit mAb乙基*氧基硅烷 曲拉通X-114Myosin IIc Antibody5-溴-2-酚 曲拉通X-405Myosin IIc Antibody野黃芩苷 異硫酸胍Phospho-M-CSF Receptor (Tyr923) Antibody硫酸 CHAPS;[(膽?;?二甲氨基]-1-磺酸IRS-1 (D23G12) Rabbit mAb1,2,3,6-四氫鄰二甲酰亞 鯉皰疹病毒3型探針法熒光PCR檢測試劑盒基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA試劑盒Phospho-RasGRF1 (Ser916) 酸化Ras特異性鳥嘌呤核苷酸釋放因子120 ul 基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA試劑盒RAR-Alpha 維甲酸受體-α 抗體10 ug 基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒RAR Beta 維甲酸受體β抗體100 ul 基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B) ELISA試劑盒RASSF1A Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗體20 ul 基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶(MMP-8/Collagenase II)ELISA試劑盒Pan-ras Pan ras抗體100 ul 基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒RCC1 染色體濃縮調(diào)控蛋白1抗體100 ul 基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)ELISA試劑盒Phospho-RCC1 (Ser11) 酸化染色體濃縮調(diào)控蛋白1抗體100 ul 基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒Rb/RB1 proin 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體100 ul 基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)ELISA試劑盒Phospho-Rb (Ser608) 酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體100 ul |