樣品RNA的抽提: ①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質(zhì)量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 產(chǎn)品名稱 | 山羊皰疹病毒2型探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Caprine Herpesvirus 2(CpHV-2) | 貨號 | YSP96523 |
實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術: 本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。 乙縮(Standard for GC,>99%(GC))Ku80 (C48E7) Rabbit mAb2,二溴噻唑 乙酰酮(Standard for GC,≥99.6%(GC))Ku80 (C48E7) Rabbit mAb2,5-二溴噻唑 酸丁酯(BA)(Standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-Rb (Ser608) Antibody溴-甲 仲丁基(Standard for GC,>99.0%(GC))Phospho-Rb (Ser608) Antibody氯-4'-羥基二甲酮 正丁(standard for GC,>99.5%(GC))eIF4G2/p97 Antibody叔丁基芐 正戊(Standard for GC,>99.5%(GC))NFAT3 (23E6) Rabbit mAb5-乙基尿嘧啶 叔丁基(Standard for GC, ≥99.5% (GC))LSD1 (C69G12) Rabbit mAb2-基-5-氟溴芐 溴(Standard for GC,>99.5%(GC))CENP-A Antibody溴-5-(三氟甲基)甲 丁酸丁酯(Standard for GC,≥99.5%(GC))CENP-A Antibody2-氨基-基吡啶 1,丁炔二(Standard for GC, ≥99.5% (GC))Phospho-CENP-A (Ser7) Antibody2,6-二氯吡 叔丁(standard for GC,≥99.5%(GC))NFAT3 (31G6) Rabbit mAb2-氯-吡啶甲 2,丁二酮(standard for GC,≥99.0%(GC))P-Cadherin (C13F9) Rabbit mAb環(huán)己甲酸 癸二酸二辛酯(DOS)(Standard for GC, ≥98.5% (GC))P-Cadherin (C13F9) Rabbit mAb醌茜隱色體 溴代正丁烷(Standard for GC,>99.5%(GC))Nocodazole5-氯-1-茚酮 正丁硫(standard for GC,≥99%(GC))SRC-1 (128E7) Rabbit mAb1,二氯酞 乙酸仲丁酯(standard for GC, ≥99.5% (GC))Presenilin 2 Antibody2,2',4'-三氯乙酮 甲酸丁酯(Standard for GC)RPA70/RPA1 (C24F2) Rabbit mAbN-甲基異 一正丁(Standard for GC,≥99.7%(GC))MG-1322-溴-氟甲 山羊皰疹病毒2型探針法熒光PCR檢測試劑盒α-輔肌動蛋白4(ACTN-4)ELISA試劑盒Lgr5/GPR49 Lgr5/GPR49抗體100 ug α-輔肌動蛋白3(ACTN-3)ELISA試劑盒LH 促黃體生成素抗體100µl α-輔肌動蛋白1(ACTN-1)ELISA試劑盒LH 促黃體生成素抗體100 ul α-防御素4(NP-4)ELISA試劑盒LH 促黃體生成素單克隆抗體100 ul α淀粉酶(AMY1)ELISA試劑盒LH 促黃體生成素抗體100 ul α半糖基(α-Gal)ELISA試劑盒LHR/CGR 促黃體生成素受體抗體100 ul α半糖苷酶(αGAL)ELISA試劑盒HDC L-組氨酸脫羧酶抗體1 Kit αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA試劑盒LHRH/GNRH 黃體激素釋放激素類似物抗體100µl αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA試劑盒LIF 白血病抑制因子抗體100 ul |