PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

?
熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
?
熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號階段，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
甲標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑：甲)VE-Cadherin Antibody2,二甲基萘

三氟乙酰(標(biāo)準(zhǔn)品)DNMT3A Antibody7-甲基靛紅

鄰三聯(lián)(標(biāo)準(zhǔn)品)α-N-Canin (C12G4) Rabbit mAb2-溴-甲酸

間三聯(lián)(標(biāo)準(zhǔn)品)EB-1 (1A11/4) Mouse mAb2-氨基-3,6-二氯甲酸

2,4,6-三硝標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.00mg/ml,基體：甲)HER2/ErbB2 (29D8) Rabbit mAb2,二氨基甲酸

四氯酚(標(biāo)準(zhǔn)品)Rab4 Antibody2-氨基-氟甲酸

對三聯(lián)(標(biāo)準(zhǔn)品)Rab4 Antibody溴氨酸

1,3,5-*(標(biāo)準(zhǔn)品)Alix (3A9) Mouse mAb溴-2,6-二甲基氟

十一烷(標(biāo)準(zhǔn)品)Calbindin (C26D12) Rabbit mAb2-溴-N,N-二

十一酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Smurf1 Antibody(偶氮)二酚

對二甲(標(biāo)準(zhǔn)品)Cyclophilin A Antibody2-硝基

對二甲標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.00mg/mL,基體:甲)HtrA2 Antibody對庚基乙酮

間二甲標(biāo)準(zhǔn)溶液(1mg/ml in Methanol,for War Analysis)Ataxin-1 Antibody5-溴-6-甲基-2(1H)-吡啶酮

鄰二甲(標(biāo)準(zhǔn)品)PGC-1α (3G6) Rabbit mAb1-氯乙基乙基碳酸酯

己二酸(Standard for GC,≥99.5%(GC))SS18 (D6I4Z) Rabbit mAb二甲氨基偶氮-4'-磺酰-L-色氨酸

乙酰(Standard for GC,≥99.5%(GC))Aiolos (D1C1E) Rabbit mAb (PE Conjuga)8-氯-1-辛

蒽(standard for GC,≥99.5%(GC))c-Cbl (C49H8) Rabbit mAb5-氯-1-戊

茴香(Standard for GC,≥99%(GC))c-Cbl (C49H8) Rabbit mAb六甲基二錫
山羊皰疹病毒1型探針法熒光PCR檢測試劑盒α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDHC)ELISA試劑盒Mannan Binding Lectin  甘露聚糖結(jié)合凝集素抗體100 ul

α清蛋白(α-La)ELISA試劑盒LEF-1  淋巴增強(qiáng)因子-1抗體100 ul

α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)ELISA試劑盒Leptin  瘦素抗體100 ul

α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)ELISA試劑盒Leptin  瘦素抗體100µl

α-內(nèi)肽(α-EP)ELISA試劑盒Leptin receptor  瘦素受體抗體100 ul

α肌動(dòng)蛋白(α Actin)ELISA試劑盒Leptin receptor(long)  瘦素受體抗體（長）100µl

α-黑色素細(xì)胞刺激素(α-MSH)ELISA試劑盒Leptin receptor(long)  瘦素受體抗體（長）100 ul

α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(α-GST)ELISA試劑盒Leptin receptor(L/M/S)  瘦素受體抗體(長、中、短型)100 ul

α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒L-enk  亮氨酸腦啡肽抗體100 ul