熒光染料的優(yōu)點: 產品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產品名稱 | 肺孢子蟲通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Pneumocystis spp. | 貨號 | YSP97085 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化。而在平臺期,擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 細胞程序性死亡蛋白1配體1(PDCD1LG1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 相思根瘤菌 5g 同種異體移植炎癥因子1(AIF1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 核盤菌 5g 蛋白酶3(PR3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 巨獸芽孢桿菌 1g 脫氫酶(XDH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 尖孢鐮孢 5g 鈷胺傳遞蛋白Ⅱ(TCN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥97% 硝基還原假單胞菌 1g 血小板反應蛋白4(THBS4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥97% 浙江芽孢桿菌 250mg 血小板反應蛋白3(THBS3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 紫芝(紫靈芝,中華靈芝) 1g 外周鞘脂蛋白22(PMP22)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 黃曲霉 250mg 外周鞘脂蛋白22(PMP22)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 淡紫擬青霉 1g 1號染色體開放閱讀框85(C1orf85)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 猴頭菌 250mg 醌NADH脫氫酶1(NQO1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 冬蟲夏草 5g 葡萄糖轉運蛋白4(GLUT4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) >98.0%(GC) 粉擬青霉 1g 脂素1(LPIN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) >98.0%(GC) 相思根瘤菌 5g 卵泡抑素樣蛋白3(FSTL3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 大豆慢生根瘤菌 1g 甲硫氨酰氨肽酶2(METAP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 密旋鏈霉菌 5g 神經肽Y受體Y2(NPY2R)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 黃桿菌 25g 神經肽Y受體Y1(NPY1R)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 賴氨酸芽胞桿菌屬 5g Anoctamin 6蛋白(ANO6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 嗜鹽四聯(lián)球菌 100g 肺孢子蟲通用探針法熒光PCR檢測試劑盒細胞周期檢測點激酶2抗體CKR-L2( G proin-coupled receptor-2 ) G蛋白偶聯(lián)受體-2(抗原)100 ul 周期素依賴性激酶9抗體GSK-3 Beta, (Glycogen Synthase Kinase-3) 葡萄糖合成激酶-3(抗原)100 ul 細胞分裂周期蛋白6抗體GTP-CH-1 三酸鳥苷環(huán)水解酶(抗原)100 ul 細胞周期調控因子34H5N1-M2(Avian influenza Matrix Proin-2) H5N1流感病毒M2型(抗原)100 ul 轉錄調節(jié)因子C/EBP β抗體HCV-Core 丙型肝炎病毒-C區(qū)(多肽)100 ug CREB結合蛋白抗體HCV-NS1 丙型肝炎病毒-NS1(抗原)100 ul 嗜酸粒細胞趨化蛋白抗體HCV-NS3 丙型肝炎病毒-NS3(抗原)100µl 黑色素瘤細胞粘附分子CD146抗體HCV-NS4a 丙型肝炎病毒-NS4a(抗原)100 ul 酸化周期素E抗體HEV 戊型肝炎病毒(抗原)100 ul PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產物量不能計算出初始模板量。 |