微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過(guò)0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

產(chǎn)品名稱：假長(zhǎng)雙歧桿菌
貨號(hào)：YS-01J13292
拉丁文: Bifidobacterium pseudolongum

分離基物: feces of animal

提供形式: 凍干物

安全等級(jí): 1

模式菌株: no

培養(yǎng)基: 改良MRS培養(yǎng)基：MRS培養(yǎng)基+0.5%L-半胱氨酸（MRS培養(yǎng)基：酪胨 10.0g，牛肉粉 8.0g，酵母粉 4.0 g，葡萄糖 20.0 g，硫酸鎂 0.2 g，乙酸鈉 5.0 g，檸檬酸三銨 2.0 g，磷酸氫二鉀 2.0 g，硫酸錳 0.05 g，吐溫80 1.0 g，蒸餾水 1000mL。

公司產(chǎn)品僅用于科研培養(yǎng)及打管說(shuō)明：

1、安瓿瓶開封：用浸過(guò)75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無(wú)菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后，延遲期較長(zhǎng)，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)

4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過(guò)高，營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng)，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物培養(yǎng)方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過(guò)分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長(zhǎng)繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。

上述兩種方法雖然都可以實(shí)現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對(duì)菌落計(jì)數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過(guò)程復(fù)雜，對(duì)平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無(wú)菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無(wú)菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無(wú)菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置，用無(wú)菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴(kuò)展，使之分布均勻。

Cyclin D2  周期素D2抗體血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A抗原

Cyclin D1/FSTL3  周期素D1抗體血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C型抗原

Cyclin C  周期素C抗體血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2

Cyclin B3  周期素B3抗體可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2

Cyclin B2  周期素B2抗體血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-3（多肽）

Cyclin B1  周期素B1抗體血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-3抗原

Cyclin A2/CCN1  周期素A2抗體血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗原

Cyclin A1  周期素A1蛋白抗體信號(hào)通路Wnt1抗原

CYBR1  色素B還原酶1抗體包含氧化還原酶的WW域抗原

CXXC5  二硫鍵氧化還原酶鋅指蛋白5抗體X-連鎖凋亡蛋白/性連鎖凋亡抑制蛋白抗原

CXX1/Cerebral protein 5  腦蛋白5抗體XIAP相關(guān)因子1凋亡抑制蛋白抗原

CXorf56  X染色體開放閱讀框56抗體X射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白/堿基切除修復(fù)基因抗原

CXorf36  脫羧酶蛋白體36抗體胞質(zhì)緊密粘連蛋白1抗原

CXorf36  脫羧酶蛋白體36抗體ARC(多肽抗原)

CXorf21  X染色體開放閱讀框21抗體血管緊張素Ⅱ受體(抗原)
假長(zhǎng)雙歧桿菌說(shuō)明書黑曲霉梅克爾-格魯伯綜合征相關(guān)蛋白抗體 Desthiazolylmethyl Ritonavir 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%

黑腐皮殼菌突變的黑色素瘤相關(guān)抗原1抗體 N-Desmethyl Rosiglitazone-d4 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%

漢塔成對(duì)桿菌黑色素瘤相關(guān)抗原10抗體 Rosiglitazone (potassium salt) 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

平菇絲裂原活化蛋白激酶激酶2抗體 rosiglitazone hydrochloride 質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=6%

綠粘帚霉G蛋白偶聯(lián)受體24抗體 5-Hydroxy Rosiglitazone 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

苜蓿莖點(diǎn)霉絲裂原活化蛋白激酶組織蛋白1抗體 5-Hydroxy Rosiglitazone Sulfate 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥90% (HPLC)

腫痂鏈球菌同源盒蛋白Meis1抗體 N-Desmethyl Rosiglitazone 質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=4%

蟲草單氨氧化酶A抗體 5-Hydroxy Rosiglitazone β-D-Glucuronide 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品