特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 禽腺病毒B型探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Fowl Adenovirus(FAdV-B) | 貨號 | YSP96726 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進(jìn)行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 白當(dāng)歸素(標(biāo)準(zhǔn)品)RPA32/RPA2 Antibody2-庚酮 白果內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)STAMBP Antibody芐基哌鹽酸鹽 白花前胡(標(biāo)準(zhǔn)品)STAMBP Antibody四亞甲基二 環(huán)杷明;環(huán)巴;去氧芥芬(標(biāo)準(zhǔn)品)Ezh2 (D2C9) XP® Rabbit mAb丁二 白樺脂Ezh2 (D2C9) XP® Rabbit mAb丁炔二 白樺脂(標(biāo)準(zhǔn)品)IRF-5 (E1N9G) Rabbit mAb (PE Conjuga)N-乙基乙二 白樺脂(標(biāo)準(zhǔn)品)COX IV (3E11) Rabbit mAb (HRP Conjuga)環(huán)己烷 白樺脂酸(標(biāo)準(zhǔn)品)HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)6-氟色滿-2-羧酸 白樺脂酸cPLA2 (D49A7) Rabbit mAb5-氨基間二甲酸 白蠟樹素(標(biāo)準(zhǔn)品)Renin Antibody溴吲哚酮 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ(標(biāo)準(zhǔn)品)ASXL1 (D1B6V) Rabbit mAb3,二羥基甲酸 白術(shù)內(nèi)酯III(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-TCTP (Ser46) Antibody硝基鄰甲酚 OR 2-甲基-酚 白頭翁皂苷B4(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Connexin 43 (Ser368) (D6W8P) Rabbit mAb2-甲基-溴甲酸甲酯 百秋李Phospho-AMPKα (Thr172) (40H9) Rabbit mAb (Biotinylad)溴-2-甲酸甲酯 百蕊草素I;山柰酚-葡萄糖鼠李糖苷;阿福豆苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Rat (LTF-2) mAb IgG2b Isotype Control (violetFluor™ 450 Conjuga)2-氨基-酚 寶藿苷I,羊藿次苷II(標(biāo)準(zhǔn)品)Anti-mouse IgG (H+L) (DyLight™ 800 4X PEG Conjuga)間二甲酰氯 貝母素甲(標(biāo)準(zhǔn)品)Anti-mouse IgG (H+L) (DyLight™ 800 4X PEG Conjuga)1,二 貝母素乙(標(biāo)準(zhǔn)品)NF-κB2 p100/p52 (D9S3M) Rabbit mAb(Boc-氨基)吡咯烷 禽腺病毒B型探針法熒光PCR檢測試劑盒APP/ABPP淀粉樣肽前體蛋白抗體CCR6/CD196/FITC 熒光素標(biāo)記趨化因子受體6抗體IgG100 ul 甲胎蛋白單克隆抗體(包被)CCR-7/FITC 熒光素標(biāo)記CC趨化因子受體7抗體IgG100 ul 甲胎蛋白單克隆抗體(檢測)CCR-8 /FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞表面趨化因子受體8抗體IgG20 ul ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白1抗體CCR-9/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞表面趨化因子受體9抗體IgG100 ul 芳香烴受體抗體CCR-10/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞表面趨化因子受體10抗體IgG100 ul 吸引素抗體CCRK/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞周期相關(guān)激酶抗體IgG100 ul 腺苷三酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1抗體CD2/FITC 熒光素標(biāo)記CD2抗體IgG20 ul 蛋白激酶B2CD2AP/FITC 熒光素標(biāo)記白細(xì)胞分化抗原CD2AP抗體IgG100 ul 血管生成素2抗體SLAMF9/CD2F-10/FITC 熒光素標(biāo)記CD2F-10抗體IgG100 ul |