PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩碚f，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

?
熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
?
熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
Rho鳥嘌呤核苷酸交換因子7(ARHGEF7)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　枯草芽孢桿菌　250mg

冠蛋白1A(CORO1A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　魯氏不動(dòng)桿菌　5g

維生素D(VD)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　賴氨酸芽胞桿菌屬　1g

含銅胺氧化酶3(AOC3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　小單孢菌　5g

肽酰甘氨酸α酰胺化單氧酶(PAM)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　大腸埃希菌　1g

海藻糖酶(TREH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　pHY300PLK　250mg

丙酮酸羧化酶(PC)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　Enterobacter cowanii　5g

卵巢濾泡激素(FLCN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　大豆慢生根瘤菌　1g

含Ⅲ型纖連蛋白域蛋白5(FNDC5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　釀酒酵母　25g

Bcl2拮抗/殺傷因子1(BAK1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　白蘑　5g

肝臟酸果糖激酶(PFKL)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　大腸埃希菌　25g

上皮基質(zhì)相互作用蛋白1(EPSTI1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　缺陷短波單胞菌　5g

葡萄糖-6-酸酶催化亞基(G6PC)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　沙雷氏菌　100g

粘蛋白20(MUC20)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　銀耳、白木耳（可訂購(gòu)）　25g

阿米洛利敏感鈉離子通道蛋白1α(SCNN1α)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　產(chǎn)氣腸桿菌　500g

核苷酸還原酶M1(RRM1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　99%　小串鏈霉菌　1g

絲氨酸蛋白酶33(PRSS33)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　99%　破傷風(fēng)試驗(yàn)毒素　25g

腫瘤壞死因子受體超家族成員1A(TNFRSF1A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　99%　釀酒酵母　5g
無綠藻通用探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒畸形表皮自調(diào)節(jié)因子1抗體ABCD-1/CCL22  嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白22抗原100 ul

腦發(fā)育同源蛋白2抗體MIP-3 beta/ELC/CCL19(Macrophage Inflammatory Proin 3 Beta)  巨噬細(xì)胞炎性蛋白19抗原1 Kit

周期素D相互作用蛋白1抗體CCL26(Eotaxin 3)  嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白3抗原100 ul

發(fā)育相關(guān)蛋白DDX3Y抗體CCR-1(CC chemokine receptor 1)  細(xì)胞表面趨化因子受體1抗原1 Kit

核仁蛋白NAP57抗體CCR-3(CC chemokine receptor 3)  CC趨化因子受體3抗原1 Kit

DLST蛋白抗體CCR-2A(C-C Chemokine receptor 2A)  細(xì)胞表面趨化因子受體2A抗原1 Kit

橋粒斑蛋白1+2抗體CCR-4(C-C chemokine receptor 4)  細(xì)胞表面趨化因子受體4抗原100 ul

橋粒芯糖蛋白2抗體CCR-6/CD196 peptide  細(xì)胞表面趨化因子受體6抗原1 Kit

細(xì)胞發(fā)育相關(guān)蛋白DAZL抗體CXCR6(CXC-chemokine receptor 6) peptide  細(xì)胞表面趨化因子受體6抗原1 Kit