特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 庫蚊通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Culex spp. | 貨號 | YSP96603 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團,3'端標(biāo)記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 4,7-二羥基-1,10-菲啰啉(>98.0%(HPLC))Dab1 Antibody1-N-Boc-順式-1,環(huán)己二 5-甲基-1,10-菲咯啉水合物(>98.0%(T))MNDA (3C1) Rat mAb2,5-二氯乙酮 1,10-鄰二氮雜菲-5,6-二酮(>98.0%(HPLC)(T))PTPA/PPP2R4 Antibody異酸基三乙氧基硅烷 TPP(=四基卟啉)Phospho-Jak1 (Tyr1034/1035) AntibodyN-叔丁氧羰基-N'-芐氧羰基-L-鳥氨酸 TMPyP[=α,β,γ,δ-四(1-甲基吡啶嗡-基)卟吩對甲磺酸鹽](>98.0%(N))Jak1 AntibodyD-別蘇氨酸 TCPP[=四(羧基)卟吩](>97.0%(HPLC)(T))ALK (C26G7) Rabbit mAb基三丁基錫 5,10,15,20-四(吡啶基)卟啉(>97.0%(N))RasGRP3 (C33A3) Rabbit mAb氨基-甲酸 8-巰基喹啉鹽酸鹽(>95.0%(T))Granzyme B (D2H2F) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)氨基-2-甲酸 偶氮甲H(>97.0%(T))ApoA5 (2G1H11) Mouse mAb2-溴-4'-羥基乙酮 縮氨基-2-硫酚(>98.0%(HPLC)(N))SMARCE1/BAF57 (E6H5J) Rabbit mAb(R)-(-)-羥基丁酸乙酯 N-甲基糠酰羥肟酸(>99.0%(HPLC))S5a/PSMD4 (D17E4) Rabbit mAb酸芐酯 2,2'-二辛可寧酸二鹽水合物(>98.0%(HPLC))Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2) Rabbit mAb (APC Conjuga)基磺酸鈉 氯冉酸(>98.0%(HPLC)(T))NME1/NDKA (G19) Antibody聚乙二二甲 N-肉桂酰-N-(2,二甲基)羥(>98.0%(HPLC)(N))Ras (27H5) Rabbit mAb1-甲基-1H-吡唑-甲 5,6-二基-(2-吡啶基)-1,2,三(>98.0%(HPLC)(T))Ras (27H5) Rabbit mAb對氯乙酰氯 α-聯(lián)呋喃甲酰二肟(>97.0%(W))HDAC7 (D4E1L) Rabbit mAb7-羥基-5-甲基-1,3,三氮吲哚利 5-二甲氨基-2-亞酚鹽酸鹽(>98.0%(HPLC)(T))Phospho-ALK (Tyr1604) Antibody乙炔基吡啶 基-2-吡啶基酮肟(>98.0%(T))Phospho-ALK (Tyr1604) Antibody乙炔基吡啶 庫蚊通用探針法熒光PCR檢測試劑盒巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA試劑盒PSAP/PAP (human) 前列腺酸性酸酶抗體()20 ul 精脲水解酶(AGMAT)ELISA試劑盒PSCA 前列腺干細(xì)胞抗原抗體100 ul 精氨酸酶1(ARG1)ELISA試劑盒PSD93 突觸后密度蛋白93抗體100 ul 精氨酸加壓素受體1A(AVPR1A)ELISA試劑盒Phospho-PSD93 (Tyr340) 酸化突觸后密度蛋白93抗體100 ul 精氨酸(Arg)ELISA試劑盒PSD95 突觸后密度蛋白95抗體100 ul 緊密連接蛋白1(ZO1)ELISA試劑盒Phospho-PSD95 (Tyr236/Tyr240) 酸化突觸后密度蛋白95抗體100 ul 緊密連接蛋白(Ocln)ELISA試劑盒PSGL-1/CD162 P選擇素糖蛋白配體1抗體100 ul 金屬轉(zhuǎn)運蛋白1(MTP1)ELISA試劑盒PSMD9 蛋白酶調(diào)解因子9100 ul 金屬硫蛋白2(MT-2)ELISA試劑盒LMP2 低分子質(zhì)量蛋白2抗體100 ul |