微生物菌種的培養(yǎng): ⒈ 孢子制備 ⑴ 孢子的制備 一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過(guò)0.5%),碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境,不利于形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃,少數(shù)為37 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為5~14天。 ⑵ 霉菌孢子的制備 霉菌的孢子培養(yǎng),一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類(lèi)培養(yǎng)基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25~28 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為4~14天。 ⒉ 種子制備 ⑴ 搖瓶種子制備 搖瓶種子進(jìn)罐,常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng),有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)濃,子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。 產(chǎn)品名稱(chēng):特基拉芽孢桿菌 貨號(hào):YS-01J12980 拉丁文: Bacillus tequilensis 分離基物: 印染廢水;采集地│第二印染廠 提供形式: 凍干物 安全等級(jí): 1 模式菌株: no 培養(yǎng)基: LB培養(yǎng)基:酵母提取物5.0g,蛋白胨10.0g,NaCl 10.0g,瓊脂15.0g,蒸餾1.0L,pH 7.0。 生長(zhǎng)條件: 30℃,好氧 生長(zhǎng)特性: 革蘭氏陽(yáng)性、嚴(yán)格好氧 存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 貨號(hào) | 特基拉芽孢桿菌說(shuō)明書(shū) | Bacillus tequilensis | YS-01J12980 |
公司產(chǎn)品僅用于科研培養(yǎng)及打管說(shuō)明: 1、安瓿瓶開(kāi)封:用浸過(guò)75%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管,用火焰加熱其頂端,滴少量無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂,用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。 2、菌株恢復(fù)培養(yǎng):用無(wú)菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基,滴入安瓿管內(nèi),輕輕振蕩,使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液,移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中,并在建議的條件下培養(yǎng)。 3、注意事項(xiàng):菌種活化前,請(qǐng)將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下,某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后,延遲期較長(zhǎng),需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng) 4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。 5、暫不啟開(kāi)的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。 保存方法: 傳代保存法:培養(yǎng)基的濃度不宜過(guò)高,營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 。 液體石蠟覆蓋保存法:該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng),適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。 懸液保存法: ① 蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。 ② 糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。 載體保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。 常用的冷凍保存法: ① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多,有些可添加保護(hù)劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。 ② 干冰保存法(-70℃左右):即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。 ③ 液氮保存法(-196℃):是適用范圍*的微生物保存法。 微生物培養(yǎng)方法: 1、平板劃線分離法:把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面,通過(guò)分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞,經(jīng)培養(yǎng)后生長(zhǎng)繁殖成單菌落。 2、稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋?zhuān)缓髮⒉煌♂尪鹊木悍謩e涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng),在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞,從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。 上述兩種方法雖然都可以實(shí)現(xiàn)觀察菌落特征的目的,但平板劃線分離法不能對(duì)菌落計(jì)數(shù),而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過(guò)程復(fù)雜,對(duì)平板的要求比較高,可參照以下步驟: a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃,向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均勻,然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿,輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿,使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部,待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。 b、制備活性污泥混合液稱(chēng)取活性污泥土樣15g,放入盛100ml無(wú)菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中,振搖15~20min混合均勻,用一支1ml無(wú)菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無(wú)菌水的大試管中充分混勻,制成活性污泥混合液。 c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置,用無(wú)菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴(kuò)展,使之分布均勻。 Phospho-p90RSK (Thr573) 磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體Patched/PTCH抗體 Phospho-p90RSK (Thr359/Ser363) 磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體前列腺素E合成酶抗體 Phospho-p73(Tyr99) 磷酸化P73腫瘤抑制基因抗體過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗體 Phospho-p70 S6 Kinase Beta 2 (Tyr389) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶β2抗體絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶Plk1抗體 Phospho-p70 S6 Kinase Beta (Thr421/Ser424) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶β2抗體磷酸化絲/蘇氨酸蛋白激酶Plk1抗體 phospho-P70 S6 Kinase beta (Thr228) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體親環(huán)蛋白(親環(huán)素)PPIG抗體 Phospho-p70 S6 Kinase Beta (Thr228) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶β2抗體磷酸化親環(huán)蛋白(親環(huán)素)PPIG抗體 phospho-P70 S6 Kinase beta (Ser371) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體磷酸化蛋白激酶AKT底物1抗體 Phospho-p63 (Ser455) 磷酸化P63腫瘤抑制基因抗體磷酸化內(nèi)分泌腺衍生血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抗體 Phospho-p63 (Ser395) 磷酸化P63腫瘤抑制基因抗體富含脯氨酸的酪氨酸激酶2抗體 Phospho-p63 (Ser160/Ser162) 磷酸化P63腫瘤抑制基因抗體磷酸化富含脯氨酸的酪氨酸激酶2抗體 Phospho-p57 Kip2 (Thr310) 磷酸化周期蛋白依賴(lài)激酶抑制因子1C抗體磷酸化富含脯氨酸的酪氨酸激酶2抗體 Phospho-p56Dok2(Tyr351) 磷酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2抗體磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體 Phospho-p56Dok2(Tyr299) 磷酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2抗體磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體 Phospho-p56Dok2(Tyr142) 磷酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2抗體磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體 特基拉芽孢桿菌說(shuō)明書(shū)白蘑菇多肽N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶12抗體 GTP.Na2 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 白地霉多肽N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶1抗體 ADP.Li3 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR 冬菇晶狀體球蛋白γ3/γC-crystallin/白內(nèi)障相關(guān)蛋白抗體 Erythritol 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 白色鹽多孢菌γ-微管蛋白復(fù)合物GCP3抗體 ADP.Ba 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 紫色團(tuán)胞鏈霉菌胍基乙酸N甲基轉(zhuǎn)移酶抗體 ADP.K 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR 運(yùn)動(dòng)節(jié)桿菌α-葡萄糖苷酶C抗體 IDP.Na2 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 粘孢白僵菌生長(zhǎng)激素釋放因子受體抗體 ADP.Na 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 釀酒酵母3-磷酸甘油脫氫酶抗體 D-(+)-Cellobiose 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
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