熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 犬流感病毒通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Canine Influenza Virus(CIV) | 貨號 | YSP96513 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 滅線標準溶液(100μg/ml,u=5%)Hexokinase I (C35C4) Rabbit mAb羥基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基 乙二(標準品)Miwi (D478) AntibodyN-丁基對璜酰 酸乙酯(標準品)IRF-5 Antibody膽固己基碳酸酯 a-硫丹(標準品)Phospho-Lamin A/C (Ser22) Antibody十九烷二酸 a-硫丹標準溶液(10μg/ml,u=5%)IRP1 (D6S4J) Rabbit mAb二異戊 β-硫丹(標準品)MCP-1 Antibody氯鄰茴香 乙氧基喹啉(標準品)SirT1 Antibody (Mouse Specific)1-丁基-甲基咪唑啉三氟(三氟甲基)酸鹽 硫丹(標準品)Grp94 (D6X2Q) XP® Rabbit mAb6-氨基-2,二氯-酚鹽酸鹽 酮中乙嘧硫標準溶液(10μg/ml,u=2%)Grp94 (D6X2Q) XP® Rabbit mAb溴-甲氧 乙標準溶液(1000μg/ml,溶劑:甲)MCP-1 Antibody (Mouse Specific)5-并咪唑硝酸鹽 圣草次苷(標準品)SRC-1 (D1M3Y) Rabbit mAb2-氧基乙 乙二乙(標準品)Phospho-Histone H2A.X (Ser139) (D7T2V) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)甲氧基羰基(三基)溴化鏻 戊酸乙酯(標準品)Cleaved Lamin A (Asp230) Antibody2-甲硫基吡啶 芴(Standard for GC,≥99%(HPLC))Lamin A/C Antibody2-氟二酸二甲酯 芴(標準品)Lamin A/C AntibodyMETHYL 5,7-DICHLORO-HYDROXYQUINOLINE-2-CARBOXYLA 芴甲氧羰酰氯(Fmoc-Cl)DHCR24/Seladin-1 (C59D8) Rabbit mAb甲基多巴 氟(標準品)Cleaved Lamin A (Small Subunit) Antibody三基氯化鍺 氟羅里硅土(農(nóng)殘級)Cleaved Lamin A (Small Subunit) (30H5) Mouse mAb基四氫吡喃 犬流感病毒通用探針法熒光PCR檢測試劑盒白介素1β前體(pro-IL1B)ELISA試劑盒phospho-JAK2(Tyr221) 酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗體100 ul 白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒Jak3 蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗體100 ul 白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒Phospho-Jak3 (Tyr785) 酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗體100 ul 白介素19(IL-19)ELISA試劑盒Phospho-Jak3 (Tyr980/981) 酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗體100 ul 白介素18結(jié)合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒JNK1/3 氨基末端激酶1/3抗體100 ul 白介素18(IL-18)ELISA試劑盒JNK2 氨基末端激酶2抗體100 ul 白介素17F(IL-17F)ELISA試劑盒JNK3/MAPK10 氨基末端激酶3抗體100 ul 白介素17B(IL17B)ELISA試劑盒Jab1 Jun激活區(qū)域-連接蛋白1抗體100 ul 白介素17A(IL-17A)ELISA試劑盒phospho-JNK1/2/3(Thr183/185) 酸化氨基末端激酶1/2/3抗體100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |