特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 腺病毒A型探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Adenovirus(AV) | 貨號 | YSP96346 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 替米考星C45H73NO151-甲基-1H-吲哚-5-胺 替米考星(標準品)C10H12O41,2-二甲基-1,4,5,6-四氫嘧啶 馬來酸噻嗎洛爾C16H18O92-氧代-苯基丁酸乙酯 馬來酸噻嗎洛爾(標準品)C10H8O42-氟-5-羥酸 替硝唑C9H6O32-溴苯磺酰氯 替硝唑(標準品)C30H40O62-氯-5-氟-6-甲基嘧啶 妥布霉素C36H28O161-(甲氧基苯基)哌 妥布霉素(標準品)C38H44O8二氯磷酸乙酯 硫酸妥布霉素C32H22O102,5-二氟苯肼 硫酸妥布霉素(標準品)C27H22O181-BOC-基哌啶 托萘酯C15H22O32-甲基-1-(甲硫基)苯基-2-嗎啉基-1-酮 拓撲替康鹽酸鹽C11H10O5四氫吡喃-甲酰氯 拓撲替康鹽酸鹽(標準品)C20H28O52-苯基苯并咪唑-5-磺酸 托拉塞米C18H16O7異戊酰氯 曲沃前列素C22H20O112--5-氟甲苯 鹽酸曲唑酮C15H12O4硝基-氯三氟甲氧基苯 鹽酸曲唑酮(標準品)C22H27,二氨基胍鹽酸鹽 曲洛司坦/ 亞硝酸鹽環(huán)氧雄烷C26H28O145-溴-2,二氟苯胺 腺病毒A型探針法熒光PCR檢測試劑盒神經(jīng)生長因子前體(proNGF)ELISA試劑盒Arfaptin 1 ADP核糖基化因子結合蛋白1抗體100 ul 神經(jīng)生長因子(NGF)ELISA試劑盒Arfaptin 2 ADP核糖基化因子結合蛋白2抗體100 ul 神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒phospho-arfaptin 2(Ser260) 磷酸化ADP核糖基化因子結合蛋白2抗體100 ul 神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白4(NRG4)ELISA試劑盒phospho-Arhgef2(Ser810) 磷酸化Rho鳥苷酸交換因子2抗體100 ul 神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白3(NRG3)ELISA試劑盒Aromatase 芳香化酶抗體20 ul 神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2(NRG2)ELISA試劑盒Aromatase 芳香化酶/細胞色素P450/雌激素合成酶抗體100 ul 神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1(NRG1)ELISA試劑盒COX-2 細胞色素c氧化酶抗體300 ul 上皮中性粒細胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑盒COX7A2 細胞色素c氧化酶COX7A2抗體100 ul 山梨脫氫酶(SDH)ELISA試劑盒ARIP2a 激活素受體2A抗體100 ul |