PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產物量不能計算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點: 產品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 產品名稱 | 放線菌屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Actinomyces spp. | 貨號 | YSP96344 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化。而在平臺期,擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 生長抑素C30H50Obeta-D-半乳糖五乙酸酯 甲苯磺酸索拉非尼C20H30O5度米芬 甲苯磺酸索拉非尼(標準品)C9H10O3(2-甲基-5-基)胍硝酸鹽 鏈脲佐菌素(STZ)C15H20O22-(5-氨基-1H-吡唑-1-基)乙 鏈脲佐菌素(標準品)C17H16O42-異基-甲氧基吡 硝酸硫康唑C19H18O3溴-2-甲氧基吡啶 硝酸硫康唑(標準品)C18H12O32-氯-甲氧基酸 舒尼替尼堿C16H12O65-甲氧基吲哚-乙酸 舒尼替尼堿(標準品)C21H22O102,5-二甲基-羥基苯甲 蘋果酸舒尼替尼C23H28O72-(1-環(huán)己烯基)乙胺 蘋果酸舒尼替尼(標準品)C20H18O6溴代-3,二甲氧基苯乙酮 舒洛芬C21H24O10對甲氧基苦杏仁酸 他克莫司C15H14O5氨基-酚 他克莫司(標準品)C22H28O62-氟-硝基-5-氯吡啶 枸櫞酸他莫昔芬C23H28O6溴鄰苯二甲酰亞胺 枸櫞酸他莫昔芬(標準品)C32H38O191H-四氮唑-5-甲酸乙酯 坦度替尼;MLN518C25H24O62-氯-5-氟苯酸 坦度替尼(標準品)C11H6O32-甲基-2-基-1,烷二 放線菌屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISA試劑盒APP/ABPP APP/ABPP淀粉樣肽前體蛋白抗體1 Kit 視黃結合蛋白(RBP)ELISA試劑盒phospho-APP/ABPP(Tyr757) 磷酸化APP(Tyr757)淀粉樣肽前體蛋白抗體1 Kit 生長抑素(SS)ELISA試劑盒phospho-APP/ABPP(Thr668) 磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體1 Kit 生長激素(GH)ELISA試劑盒APPL1 APPL1抗體1 Kit 生長分化因子15(GDF15)ELISA試劑盒AQP1 水通道蛋白1抗體1 Kit 腎損傷分子1(Kim-1)ELISA試劑盒AQP2 水通道蛋白-2抗體100 ul 腎素前體ELISA試劑盒AQP3 水通道蛋白-3抗體100 ul 腎素(Renin)ELISA試劑盒AQP4 水通道蛋白-4抗體100 ul 腎上腺髓質素(ADM)ELISA試劑盒AQP5 水通道蛋白-5抗體100 ul |