熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 小隱孢子蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Cryptosporidium parvum | 貨號 | YSP96599 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 7-(二乙氨基)-甲酸乙酯(>98.0%(GC)(T))Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb5-氯煙酸 6-[(二基氨基)基]-羧酸乙酯(>98.0%(HPLC))Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb2,3,三氟酸 熒光素二Notch1 (C44H11) Rabbit mAb1-甲基胍鹽酸鹽 熒光素二乙酸酯(>98.0%(HPLC))Axl (L283) Antibody2-乙酰基并噻吩 7-羥基-羧酸(>98.0%(HPLC))Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb六乙基亞酸 二甲氨基偶氮-4'-甲酸(>97.0%(HPLC)(T))Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb阿斯巴甜 7-二乙氨基-甲基(>98.0%(GC)(T))TNIK Antibody氨基-3,5-二氯吡啶 甲基鈣黃綠素藍(lán)水合物[用于配位滴定銅時的指示劑]CD13/APN (D6V1W) Rabbit mAb2-溴-氯吡啶 6,7-亞甲二氧基-甲基-馬來酰亞(>98.0%(HPLC)(N))JARID1B Antibody五氯二磺酰氯化物 甲基-6,7-亞甲基二氧代(>99.0 %(GC))JARID1B Antibody溴-1H-咪唑 7-甲氧基-羧酸(>98.0%(GC)(T))GβL (86B8) Rabbit mAbN-芐氧羰基-L-天冬酰 氯化頻哪(>90.0%(HPLC))GβL (86B8) Rabbit mAb反-1,2-環(huán)己烷二甲酸 化頻哪(>90.0%(HPLC))p39 Antibody2-氨基-甲酸 溶劑綠 7(>85.0%(E))PHGDH (D3D5E) Rabbit mAb (IF Formulad)2-氯-甲基-硝基吡啶 磺酰熒光素(>75.0%(HPLC)(T))HAUSP Antibody2-溴-甲基-5-硝基吡啶 N-琥珀酰亞基-7-羥基-羧酸酯(>95.0%(HPLC)(T))SimpleChIP® Human KLK3 Promor Primers6-氯煙 N-琥珀酰亞基-7-甲氧基-羧酸酯(>98.0%(HPLC)(N))HMOX2/HO-2 (D9J9U) Rabbit mAb拉帕替尼 5-(2-氨乙基氨基)-1-萘磺酸鈉水合物(>98.0%(HPLC))Shootin1 Antibody5-[[[氯-[(氟基)甲氧基]基]氨基]-6-喹唑啉]-2-呋喃甲 小隱孢子蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒抗心脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA試劑盒Phospho-PKR (Thr446/451) 酸化蛋白激酶R抗體100 ul 抗心脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA試劑盒AKT2 蛋白激酶B2100 ul 抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒RBC 紅細(xì)胞單抗100 ul 抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)ELISA試劑盒PR (progesrone receptor) 孕激素受體抗體20 ul 抗生長激素抗體(IgG)ELISA試劑盒Phospho-Progesrone Receptor (Ser190) 酸化孕激素受體抗體100 ul 抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA試劑盒PRAS40/AKT1 substra 1 蛋白激酶AKT底物1抗體20 ul 抗凝血酶受體(ATR)ELISA試劑盒Phospho-PRAS40 (Thr246) 酸化蛋白激酶AKT底物1抗體100 ul 抗凝血酶III(AT III)ELISA試劑盒X proin (N-rminus) 乙肝病毒X蛋白抗體(N端)20 ul 抗凝血酶Ⅲ抗體ELISA試劑盒Profilin 1 前纖維蛋白1抗體100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |