熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 茹拉巴德古柏線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Cooperia surnabada | 貨號 | YSP96583 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 三氯化-丁試劑(10-20%)(1mL×10)Phospho-IGF-I Receptor β (Tyr1135/1136)/Insulin Receptor β (Tyr1150/1151) (19H7) Rabbit mAb溴-5-氟甲酸 三氟化-異試劑(10-20%)(1mL×10)Insulin Receptor β (4B8) Rabbit mAb氟酸 三氟化-甲試劑(10-20%)(1mL×10)Insulin Receptor β (4B8) Rabbit mAb(2-溴乙?;?吡啶鹽 三氟化-試劑(10-20%)(1mL×10)[用于氣相色譜]Phospho-Insulin Receptor β (Tyr1345) (14A4) Rabbit mAb氨基噻吩 1-甲基-硝基-1-亞硝基胍(加約50%水濕潤,本品干重約為5g(>95.0%(T))IGF-I Receptor β Antibody(二乙氨基) N-亞硝基-N-甲基尿烷(>95.0%(GC))IGF-I Receptor β Antibody2-氨基-5-硝基二甲酮 *基硅重氮(約10%的己烷溶液,約0.6mol/L)C (D3V5H) Rabbit mAb反式-(氨基環(huán)己基)氨酸叔丁酯 N-乙酰基咪唑(>98.0%(GC)(T))Phospho-NF-κB p65 (Ser536) Antibody甲氧甲?;寤?/span> 雙三氟乙酰(>98.0%(N))Phospho-NF-κB p65 (Ser536) Antibody2,二氯-5-甲基嘧啶 七氟丁酸(>98.0%(GC)(T))F4/80 (D4C8V) XP® Rabbit mAb2-(二甲基氨基磺酰基)酸 七氟丁酸酐(>95.0%(T))Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb三正丁基疊氮化錫 1-(七氟丁酰)咪唑(>97.0%(GC)(T))Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb鄰氯芐 N-甲基雙(三氟乙酰)(>97.0%(GC))Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb5-(甲氧羰基)-2-吡啶羧酸 五氟酸酐(>95.0%(GC))NF-κB1 p105/p50 Antibody(三氟甲氧基)酸 五氟甲酰氯(>98.0%(GC)(T))Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (7F1) Mouse mAb酸 三酐(>98.0%(GC))Phospho-NF-κB p65 (Ser468) Antibody3,6-二溴噠 丁基酸(含有數(shù)量不等的酸酐)(>94.0%(T))Phospho-MYPT1 (Ser507) Antibody異丁基三乙氧基硅烷 酸(含有數(shù)量不等的酸酐)(97.0-117.0 %)Phospho-MYPT1 (Ser507) Antibody甲氧基 茹拉巴德古柏線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒貓白介素6受體(IL-6R)ELISA試劑盒PAX5 配對盒基因5抗體20 ul 貓白介素6(IL-6)ELISA試劑盒PAX7 配對盒基因7抗體100 ul 貓白介素4(IL-4)ELISA試劑盒PAX8 配對盒基因8抗體100 ul 貓白介素2(IL-2)ELISA試劑盒PAX9 配對盒基因9抗體100 ul 貓白介素12(IL-12)ELISA試劑盒PBK/TOPK PDZ連接激酶/T-LAK細胞源蛋白激酶抗體100 ul 貓α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒Phospho-PBK/TOPK (Thr9) 酸化PDZ連接激酶/T-LAK細胞源蛋白激酶抗體100 ul 貓p27核心抗原(P27)ELISA試劑盒Paxillin 樁蛋白Paxillin抗體100 ul 貓5羥色/血清素/血清(5HT/ST)ELISA試劑盒Phospho-Paxillin (Tyr118) 酸化樁蛋白Paxillin抗體100 ul 馬ELISA試劑盒P-cadherin P-鈣粘附分子抗體100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |