特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 匙形古柏線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Cooperia punctata | 貨號 | YSP96581 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 N-(*基硅基)二乙(>98.0%(GC))Phospho-PRAS40 (Thr246) (C77D7) Rabbit mAb硝基肉桂 N-*基硅基咪唑(>98.0%(T))Phospho-PRAS40 (Thr246) (C77D7) Rabbit mAb氯-2,4,5,6-四氟吡啶 N-*基硅基乙酰(>98.0%(GC))PKCι/λ (C83H11) Rabbit mAb2-氯-羥基吡啶 N-(*基硅烷基)二(>95.0%(GC))HA-Tag (6E2) Mouse mAb (HRP Conjuga)四氫噻喃-酮 二甲基氯硅烷(>95.0%(GC))Phospho-p95/NBS1 (Ser343) Antibody1,2-二甲基咪唑 1,1,3,四甲基二硅氮烷(>97.0%(GC))Phospho-p95/NBS1 (Ser343) Antibody5-甲基吡啶-酸 叔丁基二甲基氯硅烷(>98.0%(GC))p95/NBS1 Antibody3,5-雙三氟乙酰氯 1-(叔丁基二甲硅基)咪唑(>98.0%(T))β-Arrestin 1 (D7Z3W) XP® Rabbit mAb2-氟-5- N-(叔丁基二甲硅基)-N-甲基三氟乙酰(>95.0%(GC))β-Arrestin 1 (D7Z3W) XP® Rabbit mAb羥基環(huán)己烷甲酸 N,O-雙(叔丁基二甲硅基)乙酰(>95.0%(GC))Phospho-Thr-Pro-Glu (C32G12) Rabbit mAb2-基- 乙基二甲基氯硅烷(>97.0%(GC))Cystathionine γ-Lyase (D4E9J) Rabbit mAb2-溴-5-氯甲 1-(二甲基乙硅烷基)咪唑(>98.0%(T))Phospho-MAPKAPK-2 (Thr334) (27B7) Rabbit mAb羥基環(huán)己甲酸或乙酯 基二甲基氯硅烷(>99.0%(GC))Phospho-MAPKAPK-2 (Thr334) (27B7) Rabbit mAb(S)-2-甲基吡咯烷鹽酸鹽 二甲基異基氯硅烷(>90.0%(GC))DAPK1 Antibody1-丁基-甲基咪唑六氟酸鹽 1-(二甲基異基硅基)咪唑(>98.0%(T))Phospho-c-Abl (Tyr204) (C42B5) Rabbit mAb2,4,5-三咪唑 (溴甲基)二甲基氯硅烷(>95.0%(GC))SimpleChIP® Human WARS Intron 1 Primers2-氟-吡啶酸 1,雙(氯甲基)四甲基二硅氮烷(>95.0%(GC))Na,K-ATPase Antibody 2-氨基-6-甲氧基并噻唑 氯代(氯甲基)二甲基硅烷(>98.0%(GC))PI3 Kinase p110β (C33D4) Rabbit mAb2-溴-5-氯甲 匙形古柏線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒貓游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒phospho-PAK1(Ser144) 酸化p21激活激酶1抗體1Kit 貓血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒phospho-PAK2(Ser141) 酸化p21激活激酶2抗體100 ul 貓?zhí)妓狒?(CA9)ELISA試劑盒Phospho-PAK2 (Ser20) 酸化p21激活激酶2抗體100 ul 貓嗜酸粒細胞趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA試劑盒phospho-PAK3(Ser139) 酸化p21激活激酶3抗體100 ul 貓生長激素(GH)ELISA試劑盒phospho-PAK1/2/3(Thr423) 酸化p21激活激酶1/2/3抗體1 Kit 貓*狀腺原氨酸(T3)ELISA試劑盒PAK7/PAK5/MBT 激活激酶PAK7抗體100 ul 貓腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA試劑盒FAM3A 胰腺衍生因子抗體100 ul 貓窖蛋白Caveolin-1(CAV1)ELISA試劑盒PAP2c 脂酸酸酶2C抗體100 ul 貓甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒PAR-1/Thrombin receptor 蛋白酶激活受體-1抗體300 ul |