熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 人鼻病毒通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Human Rhinovirus | 貨號 | YSP96846 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 三(1,二基-1,二酮基)(1,10-鄰二氮雜菲)銪(Ⅲ)(>95.0%(T))丁二酸單甲酯(琥珀酸單甲酯) 三(2-基吡啶)合銥(III)(升華精制)(>90.0%(HPLC))R(+)-alpha-甲基芐 三(8-羥基喹啉)鋁(升華提純)(>98.0%(T))甲氧基酰 三(酰酮根)合銥(III)N-羥基酞酰亞 三[1-基異喹啉-C2,N]銥(III)(升華精制)(>99.0%(HPLC))四丁基三溴化銨 2,5-雙(二氨基基)-1,3,惡二唑(>98.0%(T))溴-5-?;拎?/span> 2,5-雙(5-叔丁基-2-并惡唑基)噻吩(>98.0%(HPLC)(N))2-噻吩酰 4,雙(5-甲基-2-并惡唑基)二(>98.0%(N))-N-甲基芐 2-(叔丁基)-5-(聯(lián)基)-1,3,惡二唑(>98.0%(HPLC))1H-吡唑-甲 1,1-雙[[N,N-二(對甲)氨基]基]環(huán)己烷(>98.0%(N))左旋樟腦-10-磺酰 (2-并噻唑基)-7-(二氨基)(>98.0%(HPLC)(T))2-氨基-5-溴甲 (2-并咪唑基)-7-(二氨基)(>98.0%(T))酸鈉 4,4'-雙[二(3,5-二甲基)氨基]-4''-基三(>98.0%(HPLC))鄰溴三氟甲 4,4'-雙[N-(1-萘基)-N-氨基]-4''-基三(>98.0%(HPLC))三氟甲基-溴 4,4'-雙(5-甲基-2-并惡唑基)芪(升華提純)(>96.0%(HPLC))5-溴-2-氟三氟甲 2-(叔丁基)-5-(聯(lián)基)-1,3,惡二唑(升華提純)(>99.0%(GC))2-氨基-5-氟三氟甲 4,4'-雙(9H-咔唑-9-基)聯(lián)(>98.0%(HPLC)(N))2,二嘧啶 2,5-二(5-叔丁基-2-并惡唑基)噻吩 (升華提純)(>99.0%(HPLC)(N))2,5,6-三溴-甲基吡啶 人鼻病毒通用探針法熒光PCR檢測試劑盒癌易感基因復合蛋白4抗體phospho-IKK alpha (Thr23) /FITC 熒光素標記酸化核因子κB激酶alpha抑制劑抗體IgG100 ul 紡錘體檢查點蛋白抗體phospho-IKK gamma (Ser376)/FITC 熒光素標記酸化核因子κB激酶gamma抑制劑抗體IgG100 ul 有絲分裂檢驗點蛋白BubR1抗體phospho-IKK alpha (Tyr463) /FITC 熒光素標記酸化核因子κB激酶alpha抑制劑抗體IgG100 ul 癌相關蛋白3抗體phospho-IKK alpha (Ser176 + Ser180) /FITC 熒光素標記酸化核因子κB激酶alpha抑制劑抗體IgG400 ul 癌相關蛋白2抗體Phospho-IKK alpha/IKK beta (Ser180/Ser181) /FITC 熒光素標記酸化核因子κB激酶alpha/beta抑制劑抗體IgG100 ul 癌抗雌激素耐藥蛋白1Phospho-IKK alpha/beta (Ser176/Ser180) /FITC 熒光素標記酸化核因子κB激酶alpha/beta抑制劑抗體IgG100 ul 胞漿支鏈氨基酸酸轉氨酶抗體phospho-IKK beta (Tyr466) /FITC 熒光素標記酸化核因子κB激酶beta抑制劑抗體IgG20 ul 酸化癌抗雌激素耐藥蛋白1抗體phospho-IKK beta (Tyr199) /FITC 熒光素標記酸化核因子κB激酶beta抑制劑抗體IgG100 ul 促凋亡調節(jié)蛋白BNIP3抗體phospho-IKK beta (Tyr188) /FITC 熒光素標記酸化核因子κB激酶beta抑制劑抗體IgG1 Kit PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |