熒光定量PCR試劑盒技術(shù): 產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設(shè)有限位凸起,下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起,兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿,固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分,并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計(jì)并合成引物,完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。 產(chǎn)品名稱 | 貓免疫缺陷病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Feline Immunodeficiency Virus (FIV) | 貨號 | YSP96716 |
樣品RNA的抽提: ①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質(zhì)量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 實(shí)驗(yàn)過程: 一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項(xiàng) 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 表沒食子兒茶素PDI (C81H6) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)3,二氫-2H-吡喃-2-甲 表兒茶素沒食子酸酯Drebrin (pan) AntibodyN-乙基嗎啉 萊苞迪甙AArgonau 1 (D84G10) XP® Rabbit mAb溴-甲 萊苞迪甙A(標(biāo)準(zhǔn)品)Argonau 1 (D84G10) XP® Rabbit mAb酮縮甘油 環(huán)亮氨酸甲酯鹽酸鹽Argonau 3 (D15D2) Rabbit mAb氟芐 水溶性四氮唑-3LRF/Pokemon (D7U2O) Rabbit mAb間甲 三溴新戊Phospho-Akt (Thr308) (C31E5E) Rabbit mAb (Biotinylad)2-基吡啶 水溶性四氮唑-1β-Actin (13E5) Rabbit mAb (Biotinylad)氟-甲 Tris HCl;三羥甲基氨烷鹽酸鹽NPC1L1 Antibody1-(2-甲氧基基)哌鹽 Tricine;三(羥甲基)甲基甘氨酸Granzyme B (D2H2F) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-溴-甲酸甲酯 三(羥甲基)甲基甘氨酸(標(biāo)準(zhǔn)品)α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjuga)三異丁基鋁 SAR245409 (XL765)RKIP (G38) Antibody亞碲酸鈉 3,3',5,5'-四甲基聯(lián)(TMB) HO-1 (P249) Antibody氯化鎘 S. Na;2-[(三(羥甲基)甲基)氨基]-1-乙磺酸鈉α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)5-甲基色鹽酸鹽 S;Tris乙磺酸,2-[(三(羥甲基)甲基)氨基]-1-乙磺酸S100A1 Antibody氯化亞汞 [ (N-三(羥甲基)甲氨基]-2-羥基磺酸鈉Sox2 (D6D9) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)亞硫酸 TAPSO;[ (N-三(羥甲基)甲氨基]-2-羥基磺酸HCFC1 Antibody (Carboxy-rminal Antigen)DL-高氨酸 N-三(羥甲基)甲基-氨基磺酸鈉ELP1/IKBKAP Antibody乙?;?/span> 貓免疫缺陷病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體Calpain 1/FITC 熒光素標(biāo)記鈣蛋白酶抗體IgG100 ul 肺α/β水解酶蛋白3抗體Calpain 2/FITC 熒光素標(biāo)記鈣蛋白酶2抗體IgG100 ul 三酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白F亞基3抗體Calponin 1/FITC 熒光素標(biāo)記鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體IgG100 ul 三酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A亞基5抗體Camk1g/FITC 熒光素標(biāo)記鈣/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激酶IG抗體 IgG100 ul ADCK1蛋白抗體CaMK2a/FITC 熒光素標(biāo)記鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體IgG100 ul 酰基輔酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體CaMK2b/FITC 熒光素標(biāo)記鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2b抗體IgG20 ul α/β水解酶4抗體CANX/FITC 熒光素標(biāo)記抗鈣連蛋白抗體IgG100 ul ADCK2蛋白抗體ISR- Alpha/RBITC 紅色熒光素羅丹明標(biāo)記(RBITC)胰島素受體-α抗體IgG(標(biāo)記抗體)300 ul 乙脫氫酶16家庭A1抗體CAP2/FITC 熒光素標(biāo)記環(huán)化酶相關(guān)蛋白CAP-2抗體IgG100 ul |