特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 解沒食子酸鏈球菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Streptococcus gallolyticus | 貨號 | YSP97225 |
熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實(shí)驗(yàn)時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒感染試劑盒 LZTS2 ELISA Kit 300 ul 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒穩(wěn)態(tài)表達(dá)細(xì)胞篩選試劑盒(HAT+潮霉素) MAB21L2 ELISA Kit 100 ul 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染試劑盒 MAGEB4 ELISA Kit 10 mg SiRNA大量SperfusinX脂質(zhì)體細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 LY96 ELISA Kit 100 ul SiRNA大量SperfusinX脂質(zhì)體靜脈法動物轉(zhuǎn)染試劑盒 LY6K ELISA Kit 100 ul SiRNA大量SperfusinX脂質(zhì)體腹腔法動物轉(zhuǎn)染試劑盒 LYAR ELISA Kit 100 ul SiRNA大量SperfusinX脂質(zhì)體局灶法動物轉(zhuǎn)染試劑盒 LYG1 ELISA Kit 100 ul 動物細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 LYN ELISA Kit 20 ul β-半乳糖苷酶標(biāo)準(zhǔn)曲線化學(xué)發(fā)光法測定試劑盒 LYPLA1 ELISA Kit 100 ul 動物組織β-半乳糖苷酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 LYRM7 ELISA Kit 100 ul 細(xì)胞β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒 LYPLAL1 ELISA Kit 300 ul 全組織β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒 LYAR ELISA Kit 100 ul 冰凍切片β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒 LY6K ELISA Kit 100 ul 通用型組織/細(xì)胞β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒 LYN ELISA Kit 100 ul 細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒 LYG1 ELISA Kit 100 ug 全組織衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒 LY96 ELISA Kit 100 ul 解沒食子酸鏈球菌探針法熒光PCR檢測試劑盒Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白3A抗體MIP-2 巨噬細(xì)胞炎性蛋白-2100 ul Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白4抗體MIP-3 Alpha 巨噬細(xì)胞炎性蛋白-3α100 ul 卵泡刺激素結(jié)合蛋白2抗體MIP-3 Beta 巨噬細(xì)胞炎性蛋白-3β20 ul 葉酸鹽多谷氨酸合成酶抗體MIP-4 巨噬細(xì)胞炎性蛋白-4100 ul 胚胎干細(xì)胞相關(guān)蛋白FOPNL抗體MIP-5 巨噬細(xì)胞炎性蛋白-5100 ul 酸化癌基因FOS蛋白B抗體MCP-1 巨噬細(xì)胞趨化蛋白-1100 ul 叉頭蛋白D2抗體MSLN human 間皮素100 ul 叉頭蛋白E3抗體MDA(Human malondialchehyche) 丙二()100 ul 叉頭蛋白F2抗體RANS 趨化因子100 ul |