熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
髓細(xì)胞觸發(fā)受體1(IREM1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　(D4, 98%)　泌液克里格范瑞吉酵母　1g

印度刺猬因子(IHH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　(D4, 98%)　大櫻桃葉細(xì)菌性穿孔病*　5g

POTE錨蛋白域家族成員G(POTEG)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　(D5, 99%)　頭狀絲孢酵母　5g

Neudesin神經(jīng)營養(yǎng)因子(NENF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　D,99%　膠孢鐮孢　5g

細(xì)胞色素P450家族成員7A1(CYP7A1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　淺紫灰鏈霉菌產(chǎn)色變種　25g

高遷移率族AT Hook蛋白1(HMGA1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　醬油曲霉　10g

白介素3受體α(IL3Rα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　雜色曲霉　5g

神經(jīng)肽Y受體Y1(NPY1R)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　豬丹毒絲菌　5mg

神經(jīng)肽Y受體Y2(NPY2R)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　假單胞菌屬　1g

白介素17D(IL17D)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　平菇新農(nóng)1號　5g

肽基精氨酸脫亞氨酶Ⅳ(PADI4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　95%　沙針草狀孢菌　1g

基質(zhì)金屬蛋白酶16(MMP16)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　95%　灰紅鏈霉菌　250mg

封閉蛋白4(CLDN4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　茄拉爾氏菌　1g

高爾基蛋白73(GP73)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　膠質(zhì)芽孢桿菌*　250mg

信號素4D(SEMA4D)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　釀酒酵母　25g

信號淋巴細(xì)胞激活分子家族成員7(SLAMF7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　紅法夫酵母*　5g

叢狀蛋白B1(PLXNB1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　>98.0%(GC)　布萊克爾假絲酵母　25g

食道癌相關(guān)基因4(ECRG4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　>98.0%(GC)　豬丹毒絲菌　5g
丙酸桿菌通用探針法熒光PCR檢測試劑盒酶動(dòng)力蛋白2抗體Substance P Receptor (Neurokinin receptor1;Tachykinin receptor1)  P物質(zhì)受體（抗原）1 Kit

防御素β2/Defensin β2抗體p-Caldesmon(phosphor-Ser789)  酸化鈣介質(zhì)素抗原1 Kit

多巴受體相互作用蛋白5抗體NK-2R peptide  神經(jīng)激肽A受體（多肽抗原）1 Kit

性發(fā)育轉(zhuǎn)錄因子蛋白DMO抗體Calpain 1  鈣蛋白酶（多肽）1 Kit

無胸腺癥關(guān)鍵蛋白6樣抗體（迪格奧爾格綜合征）Tanis/SELS (Selenoproin S)又稱SELS  炎癥負(fù)調(diào)控因子蛋白（抗原）1 Kit

軸絲動(dòng)力蛋白10抗體Tau proin  微管相關(guān)蛋白（抗原）1 Kit

D型天冬氨酸抗體omerase ()  端粒酶（催化亞單位）（多肽抗原）500µl

DYDC1蛋白抗體TGF-Alpha (Ttansforming Growth Factor –Alpha)  轉(zhuǎn)移生長因子–α（抗原）1 Kit

二氫嘧啶抗體CaMK2a(calcium/calmodulin-dependent proin kinase II alpha)  鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗原1 ml