特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 貓庖疹病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Feline Herpes Virus | 貨號 | YSP96713 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 4,4'-二氟環(huán)己鹽酸鹽Phospho-VEGF Receptor 2 (Tyr951) (15D2) Rabbit mAb2-萘乙酮 積雪草酸Phospho-VEGF Receptor 2 (Tyr951) (15D2) Rabbit mAb2,二 積雪草酸(標準品)PABP1 Antibody間氨基乙酮 佛司可林(標準品)SMG-1 (Q25) Antibody間羥基甲酸 黃藤素(標準品)NIK Antibody檸酸 鹽酸西那卡塞;鹽酸甲狀旁腺激素NIK Antibody2,2,2-三氯乙酰 黃藤素CUL1 Antibody硫 鏈霉蛋白酶/鏈絲菌蛋白酶/鏈霉菌蛋白酶UBC3 Antibody2,2'-二硫二吡啶 抗蛋白酶(進口)UBC3 Antibody硝基兒茶酚 D-巖藻糖NFAT4 Antibody氨基丁酸 N-乙酰-DL-絲氨酸Phospho-RelB (Ser552) Antibody膽固甲酰氯 玉米素JunD (D17G2) Rabbit mAb氨基甲酸 水飛薊素MyD88 (E9K4E) Mouse mAb對二基甲 水飛薊素CaMKII-α (6G9) Mouse mAb對乙基 鐵蛋白Vasopressin (D8T3K) Rabbit mAb甲 鵝去氧膽酸(標準品)Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb2,5-二溴間二甲 鵝去氧膽酸Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)對二甲酰氯 胰島素(牛)p44/42 MAPK (Erk1/2) (137F5) Rabbit mAb (Biotinylad)二水合鋨酸 貓庖疹病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒軸抑制蛋白2抗體BrdU/FITC 熒光素標記溴脫氧尿苷抗體IgG100 ul 血管生成素相關蛋白6抗體SMARCA4/SNF2 beta/FITC 熒光素標記抑癌基因SNF2β抗體IgG100 ul Muellerian繆勒管激素抑制因子抗體BRMS-1/FITC 熒光素標記癌轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體IgG300 ul 酪氨酸蛋白激酶受體A8抗體BTG2/TIS21/FITC 熒光素標記B細胞遷移基因2抗體IgG100 ul 脂肪酰輔酶A家族成員1抗體Brucella/FITC 熒光素標記抗布魯氏菌抗體IgG300 ul 芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白樣2抗體Brucella/HRP 辣根過氧化物酶標記抗布魯氏菌抗體IgG100 ul 酸化芳香N-乙?;D(zhuǎn)移酶抗體Brucella/Biotin 生物素標記抗布魯氏菌抗體IgG20 ul 肌動蛋白結(jié)合蛋白1抗體BSEP/FITC 熒光素標記膽汁酸鹽輸出泵蛋白抗體IgG100 ul 粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體BSP/FITC 熒光素標記骨涎蛋白抗體IgG100 ul |