特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 禽沙門氏菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Salmonella gullinarum | 貨號(hào) | YSP97158 |
熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺(tái)期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 甲巰蛋白(TPN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 鏈格孢 1g 硫嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶(TPMT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 總狀共頭霉 5g 血栓烷受體(TP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥95% Xanthomonas gardneri 1mg 胸腺生成素(TMPO)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 類干酪乳桿菌類干酪亞種 100g 成簇蛋白(TUFT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 蠟狀芽孢桿菌 25g Sciellin蛋白(SCEL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 煙曲霉 5g 分離蛋白1(SCRN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 禽勞斯肉瘤病毒 100g 同線蛋白1(ST1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 產(chǎn)氣莢膜梭菌 毒素C型 25g 胞裂蛋白1(SEPT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 木霉 5g Sestrin 2蛋白(SESN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 枝孢屬 1g Senataxin蛋白(SETX)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 香菇 250mg Sideroflexin 1蛋白(SFXN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 謝瓦曲霉 5g 肌糖α(SGCα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 南極世宗菌 100MG 精胺合酶(SMS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% (HPLC) 傳染性法氏囊病病毒 10MG Smoothelin蛋白(SMTN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 化妝品 金黃色葡萄球菌(陽性) 1g 錫蛋白(SNN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 葡萄座腔菌 5g 互生蛋白β1(SNTβ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 產(chǎn)氣莢膜梭菌 毒素A型 100ml Snurportin 1蛋白(SNUPN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 嗜鹽動(dòng)性球菌 25ml 禽沙門氏菌探針法熒光PCR檢測試劑盒聚合酶延伸因子抗體Nephrin Proin 去氧腎上腺素100 ul 神經(jīng)生長因子調(diào)控抑制蛋白抗體Neurocan 神經(jīng)粘蛋白抗原100 ul 內(nèi)皮細(xì)胞分化鞘脂G蛋白偶聯(lián)受體1抗體NF2/merlin(neurofibromatosis type 2) 2型神經(jīng)纖維瘤抗原100 ul 紅細(xì)胞分化相關(guān)因子1抗體NFATc1 活化T細(xì)胞核因子1蛋白100 ul 微管相關(guān)蛋白樣蛋白3抗體phospho-NFKB p65 (pSer536) peptide 酸化細(xì)胞核因子/酸化k基因結(jié)合核因子抗原20 ul 內(nèi)皮抑素/內(nèi)皮他丁抗體NF-κBp50(p50 NF-kappa B;p50NFKB) 細(xì)胞核因子50/κ基因結(jié)合核因子50抗原1 Kit 雌激素受體β抗體NGN3(neurogenin 3; Neurog3) 神經(jīng)元素3抗原1 Kit 雌激素受體α抗體NGX6 (nasopharyngeal carcinoma/NPC associad gene 6) 鼻咽癌細(xì)胞相關(guān)基因6(多肽)100µl 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Aβ相關(guān)結(jié)合蛋白抗體NIT2 (nitrilase family, member 2) NIT2蛋白抗原100 ul |