樣品RNA的抽提: ①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質(zhì)量檢測(cè) 1)紫外吸收法測(cè)定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測(cè)定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 產(chǎn)品名稱 | 微黃*線蟲探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Nematodirus helvetianus | 貨號(hào) | YSP97000 |
實(shí)驗(yàn)過程: 一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè) 三、注意事項(xiàng) 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。 2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。 3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術(shù): 本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設(shè)有限位凸起,下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起,兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿,固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分,并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計(jì)并合成引物,完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。 AIP1 英文名稱: 激活素受體相互作用蛋白1抗體 0.2ml Anti-CD158b2/KIR2DL3/NKAT2a/FITC 熒光素標(biāo)記NK細(xì)胞抑制性受體2DL3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml Mouse Mucin-7,MUC7 ELISA Kit 小鼠粘蛋白/粘液素7Multi-class antibodies規(guī)格: 48T Anti-BRCA1(mouse rat)/FITC 熒光素標(biāo)記癌易感基因1抗體(小鼠 大鼠)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2mlKit進(jìn)口/分裝 人γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒英文名稱:Human interferon-inducible protein 16,IFI16/p16 ELISA Kit* 人γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-ECS)ELISA試劑盒英文名稱:Humanγ-glutamyl systeine synthetase,γ-ECS ELISA Kit* 人γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(G) ELISA試劑盒英文名稱:Human gamma glutamyl transpeptidase,GG ELISA Kit進(jìn)口/原裝 人γ肽(Pγ)ELISA試劑盒英文 X-114室溫保存100mL 曲拉通 X-100Triton X-100室溫保存100mL 隱丹參酮Cryptotanshinone35825-57-120mgHPLC≥98% 隱綠原酸;4-咖啡酰奎寧酸Cryptochlorogenic acid905-99-720mgHPLC≥98% 印烏堿Indiaconitine20mgHPLC≥98% 櫻黃素;李屬異黃酮;李屬異黃酮;5,4'-二羥基-7-甲氧基異黃酮Prunetin552-59-020mgHPLC≥98% 鷹嘴豆芽素A;雞豆黃素A,生原禪寧A,5,7-二羥基-4’-甲氧基異黃酮;拜查林Biochanin A491-80-520mgHPLC≥98% 硬飛燕草堿Belsoline509-18-220mgHPLC≥98% 右旋四氫巴馬汀d-Tetrahydropalmatine3520-14-? Rhesus antibody Rh EphA5/Eph receptor A5 酪氨酸蛋白激酶A5受體抗體 規(guī)格 0.1ml Mouse Qa lymphocyte antigen 2 region,Qa-2 ELISA Kit 小鼠Qa淋巴細(xì)胞抗原2 96T MRG15 英文名稱: 轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子MRG15抗體 0.2ml C17orf66 英文名稱: 17號(hào)染色體開放閱讀框66抗體 0.2ml Anti-OPN 骨橋蛋白抗體(分泌型蛋白1)人Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml anti-CMV IgM(Human anti-cytomegalovirus IgM antibody) ELISA Kit 人抗巨細(xì)胞病毒抗體IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 48T Anti-PP2Ac 酸酯酶-2Ac抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml Rhesus antibody Rh Hepatic lipase 肝脂酶抗體 規(guī)格 0.2ml P III NP(Human N-terminal procollagen III propeptide) ELISA Kit 人Ⅲ型前膠原肽 96T PCDH7 英文名稱: 原鈣粘蛋白7抗體 0.2ml 脂酰肌醇3激酶P85α 單克隆抗體PI3 Kinase P85α Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78 單克隆抗體GRP78/Bip Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 信號(hào)傳導(dǎo)蛋白SMAD3 單克隆抗體Smad3 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子和轉(zhuǎn)錄激活因子3 單克隆抗體STAT3 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78 單克隆抗體GRP78/Bip Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 核酮糖-1,5-二酸羧化酶/加氧酶 (Large Chain) 單克隆抗體Rubisco (Large Chain) Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 微黃*線蟲探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白134抗體Tubulin- Gamma/FITC 熒光素標(biāo)記微管蛋白-γ抗體IgG100 ul 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白69抗體 Beta-Actin/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記β-肌動(dòng)蛋白(抗體)1 Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白98抗體Tuberin/TSC2/FITC 熒光素標(biāo)記馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體IgG1 Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白70抗體Phospho-Tuberin/TSC2 (Tyr320) /FITC 熒光素標(biāo)記酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體IgG1 Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白51抗體Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1387)/FITC 熒光素標(biāo)記酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體IgG1 Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白125抗體Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser939) /FITC 熒光素標(biāo)記酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體IgG100 ul 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體Phospho-Tuberin/TSC2 (Tyr1571)/FITC 熒光素標(biāo)記酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體IgG1 Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白90A抗體Phospho-Tuberin/TSC2 (Thr1462)/FITC 熒光素標(biāo)記酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體IgG1 Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白71抗體VTG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗魚、青鳉魚卵黃蛋白原抗體IgG100 ul |