PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

?
熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
?
熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
D(+)-二甲酰一水(>98%，BR)IL-6 (D5W4V) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific) (PE Conjuga)氟-甲氧基乙酮

己二二(>98%，BR)Thy1/CD90 (D3V8A) Rabbit mAb甲硫基-1-己

十二基丁二酸酐(>98%，BR)XAF1 (E1E4O) Rabbit mAb2-(三氟甲氧基)甲酰氯

癸二酸(>96%，BR)Ingrin α2b (D8V7H) Rabbit mAb2-(二氟甲氧基)甲

脫氫乙酸(>98%，BR)PTPN14 (D5T6Y) Rabbit mAb氟-三氟甲酸

脫羰秋水仙P2X7 Receptor (E1E8T) Rabbit mAb2,2'-聯(lián)喹啉

DON毒素，嘔吐毒素；脫氧雪腐鐮刀菌(>98%(HPLC),BR)MyoD1 (D8G3) XP® Rabbit mAb1-二甲基氨基-2-硝基乙

第威德合金MyoD1 (D8G3) XP® Rabbit mAb對(duì)二甲基

二乙酰一肟(>98%，BR)KIF3B AntibodyS-聯(lián)萘酚酸酯

二丁基二月桂酸錫(>95%,BR)Phospho-Smad1 (Ser463/465)/ Smad5 (Ser463/465)/ Smad9 (Ser465/467) (D5B10) Rabbit mAb異基肼鹽酸鹽

二二(>98%，BR)Phospho-Smad1 (Ser463/465)/ Smad5 (Ser463/465)/ Smad9 (Ser465/467) (D5B10) Rabbit mAb1-氯-2-萘酚

亞硝酸二環(huán)己(>98%，BR)Lamin B2 (E1S1Q) Rabbit mAb甲氧基-2-(三氟甲基)甲

馬來酸二乙酯(>98%，BR)CDIP Antibody4,5-二氟-2-溴

硫酸乙酯(>98%，BR)ERRα (E1G1J) Rabbit mAb3,5-二甲氧基溴芐

二氫細(xì)胞松弛素(>98%，BR)SimpleChIP® Mouse OGDH Intron 1 Primers2-氟-6-羥基

二異辛(>98%，BR)NLRX1 (D4M3Z) Rabbit mAb硝基水楊酸

碳酸二甲酯(>99%,BR)SignalSilence® BIN1 siRNA I5-溴-2,二氟磺酰氯

間二甲酸二甲酯(>99%,BR)ASC/TMS1 (E1E3I) Rabbit mAb3,二乙氧基甲酸
牛細(xì)小病毒探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白1(IFITM1/CD225/IFI17)ELISA試劑盒GST tag  GST標(biāo)簽蛋白抗體100 ul

干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA試劑盒/GLUR  谷胱甘肽還原酶抗體300 ul

干擾素誘導(dǎo)T細(xì)胞趨化因子(ITAC/CXCL11)ELISA試劑盒GTP cyclohydrolase 1/GTP-CH-1  三酸鳥苷環(huán)水解酶抗體5 mg

干擾素活化基因205(Ifi205)ELISA試劑盒GTSE-1  G2期/S期應(yīng)答相關(guān)蛋白1抗體100 ul

干擾素調(diào)節(jié)因子8(IRF8)ELISA試劑盒Matrix Proin-2 (H5N1)  A型病毒H5N1-M2蛋白抗體100 ul

干擾素調(diào)節(jié)因子3(IRF3)ELISA試劑盒matrix proin 2 (H1N1)  甲型流感病毒M2抗體300 ul

干擾素a-抗體(Anti-IFN-ab)ELISA試劑盒H1N1, Matrix Proin-2  A型豬流感病毒H1N1-M2蛋白抗體100 ul

鈣轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶2C型成員1(ATP2C1)ELISA試劑盒Influenza A Virus Hemagglutinin   甲型流感病毒血凝素抗體500 ul

鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1(CNR-1)ELISA試劑盒Influenza A Virus Hemagglutinin   甲型流感病毒血凝素抗體100 ul