產(chǎn)品僅用于科研注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。 產(chǎn)品名稱:長雙歧桿菌PCR檢測試劑盒說明書 英文名稱:Bifidobacterium longumPCR 編號:HE30697-R 類別:PCR檢測試劑盒 儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。 運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。 ? 儲需要自備的器材: 1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20 µL、200 µL、1000 µL)。 2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水 處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。 特點(diǎn): 1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。 2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。 3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 4. 提供陽性對照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。 保存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 哈爾滿生物堿標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 HARMANE ALKALOIDS STANDARDS KIT(RG) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 包裝;5g 生姜標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 GINGER STANDARDS KIT(P) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 包裝;10g 生姜標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 GINGER STANDARDS KIT(P) 質(zhì)量規(guī)格:>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;5g 大蒜臭氣標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 GARLIC STENCH STANDARDS KIT(SG) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 包裝;1g 大蒜標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 GARLIC STANDARDS KIT(SH) 質(zhì)量規(guī)格:BS 包裝;25g 紅景天標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 GOLDENROOT (RHODIOLA ROSEA) STANDARDS KIT(P) 質(zhì)量規(guī)格:>97%(HPLC),BC 包裝;5g 紅景天標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 GOLDENROOT (RHODIOLA ROSEA) STANDARDS KIT(P) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 包裝;25g 北美黃蓮標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 GOLDENSEAL STANDARDS KIT(P) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 包裝;5g 沒藥甾酮標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 GUGGULSTERONES STANDARDS KIT(P) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BC 包裝;100ml 沒藥甾酮標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 GUGGULSTERONES STANDARDS KIT(P) 質(zhì)量規(guī)格:BC 包裝;25ml 積雪草標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 GOTU KOLA STANDARDS KIT(P) 質(zhì)量規(guī)格:BC 包裝;1g 積雪草標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 GOTU KOLA STANDARDS KIT(P) 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 包裝;25g GOLDTHREAD(COPTIS) STANDARDS KIT(P) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 包裝;5g 葡萄多酚標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 GRAPE POLYPHENOLICS(STILBENES) STANDARDS KIT(P) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 包裝;250mg 葡萄多酚標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 GRAPE POLYPHENOLICS(STILBENES) STANDARDS KIT(P) 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 包裝;1g 葡萄糖胺標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 GLUCOSAMINE STANDARDS KIT(RG) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 包裝;250mg 刺五加苷標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒# 2 ELEUTHEROSIDE STANDARDS KIT #2(P) 質(zhì)量規(guī)格:BR 包裝;25g 長雙歧桿菌PCR檢測試劑盒說明書Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus 中文名稱:德氏乳桿菌保加利亞亞種種屬:Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus提供形式:凍干管;1mL菌液;安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:酸奶培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:MRS培養(yǎng)基::酪胨 10.0g,牛肉粉 8.0g,酵母粉 4.0 g,葡萄糖 20.0 g,硫酸鎂 0.2 g,乙酸鈉 5.0 g,檸檬酸三銨 2.0 g,磷酸氫二鉀 2.0 g,硫酸錳 0.05 g,吐溫80 1.0 g,蒸餾 1000mL。pH6.2±0.2。傳代方法①凍干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂輪在凍干管壁劃兩圈,掰斷,用200μL無菌或培養(yǎng)基:充分溶解,平板涂布,活化培養(yǎng)。 ②斜面:試管口用75%酒精擦拭后,火焰灼燒,后用無菌接種鏟切塊,挑取接入平板或斜面,培養(yǎng)。生長條件:37℃,厭氧。生長特性G+,菌體長桿狀,兩端鈍圓,鏈狀排列,無芽胞,有異染粒。菌落圓形,表面粗糙,突起,邊緣整齊,淺黃色,不透明。發(fā)酵葡萄糖、果糖,不發(fā)酵木糖、蔗糖、阿拉伯糖。從葡萄糖酸鹽產(chǎn)酸,接觸酶陰性,牛奶反應(yīng)產(chǎn)酸、酸凝,兼性厭氧。15℃不生長,45℃生長。產(chǎn)乳酸。存儲條件:2-8℃冷藏 純度:99% Acetobacter sp. 中文名稱:醋酸菌種屬:Acetobacter sp.提供形式:凍干管,斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:氧化乙醇產(chǎn)醋酸培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:醋酸菌培養(yǎng)基::Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (瓊脂) 15g Distilled water (蒸餾) 1000ml Adjust (調(diào)) pH to 6.8傳代方法①凍干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂輪在凍干管壁劃兩圈,掰斷,用200μL無菌或培養(yǎng)基:充分溶解,平板涂布,活化培養(yǎng)。 ②斜面:試管口用75%酒精擦拭后,火焰灼燒,后用無菌接種鏟切塊,挑取接入平板或斜面,培養(yǎng)。生長條件:30℃,好氧存儲條件:2-8℃冷藏 純度:99% Agrobacteriumrhizogenes(Rikeretal.)Conn 中文名稱:發(fā)根土壤桿菌(發(fā)根植物單胞菌)種屬:Agrobacteriumrhizogenes(Rikeretal.)Conn安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:9生長條件:25-28℃ 純度:≥98% Lactobacillus plantarum 中文名稱:植物乳桿菌種屬:Lactobacillus plantarum提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:研究;分析檢測。檢測煙酸、泛酸、生物素。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:MRS培養(yǎng)基::酪胨 10.0g,牛肉粉 8.0g,酵母粉 4.0 g,葡萄糖 20.0 g,硫酸鎂 0.2 g,乙酸鈉 5.0 g,檸檬酸三銨 2.0 g,磷酸氫二鉀 2.0 g,硫酸錳 0.05 g,吐溫80 1.0 g,蒸餾 1000mL。pH6.2±0.2。生長條件:37℃,微好氧存儲條件:2-8℃ 純度:97% Alcaligenes│faecalis 中文名稱:蔥頭伯克氏菌種屬:Alcaligenes│faecalis提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:化妝品抗菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0002生長條件:28℃存儲條件:真空冷凍干燥法;定期移植法 純度:97% IymomonasmobilisKluyverandVanNiel 中文名稱:運(yùn)動發(fā)酵單孢菌種屬:IymomonasmobilisKluyverandVanNiel安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:產(chǎn)灑精培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:53生長條件:30℃半?yún)捬跖囵B(yǎng) 純度:97% Micrococcus│lysodeikticus 中文名稱:溶壁微球菌種屬:Micrococcus│lysodeikticus提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:溶菌試驗(yàn)培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0002生長條件:28℃存儲條件:真空冷凍干燥法;定期移植法 純度:96% Streptococcus│faecalis 中文名稱:糞鏈球菌種屬:Streptococcus│faecalis提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:用于測定各類氨基酸。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0500生長條件:28℃存儲條件:真空冷凍干燥法;定期移植法 純度:96% 反應(yīng)五要素: 參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則: ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。 ②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。 ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。 ⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。 ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。 ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。 引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。 技術(shù)原理: DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。 在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性) 產(chǎn)品僅用于科研發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。 |