特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 光滑念珠菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Candida glabrata | 貨號 | YSP96503 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 氟離子(F-)標準溶液(1000mg/L,基體:水)PD-L1 (E1L3N®) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2-甲氧基-甲基-5-硝基吡啶 金標準溶液(1000μg/ml)CTLA-4 (D4E9I) Rabbit mAb3,雙(二氟甲氧基)甲 鎵標準溶液(1000μg/ml,介質(zhì):1.5mol/L HCl)OX40 (D4N3K) Rabbit mAb基環(huán)酮 鍺標準溶液(1000μg/ml)OX40 (D1S6L) Rabbit mAb(2-BOC-氨乙基)哌啶 釓標準溶液(1000μg/ml)BRD7 (D9K2T) Rabbit mAb羥基喹啉 釓標準溶液(1000µg/mL,基體:10%HCl)β-Amyloid (D3D2N) Mouse mAb己酸異酯 鈥標準溶液(1000μg/ml,溶劑:1.0Mol/L HNO3)β-Amyloid (D3D2N) Mouse mAb伊馬替尼 鈥標準溶液(1000µg/mL,基體:10%HCL)IGF-II Receptor/CI-M6PR (D8Z3J) Rabbit mAb(S)-(-)-2-甘氨 鐵標準溶液(1000μg/ml,介質(zhì):1.0mol/L 硝酸)RGS4 (D4V1P) Rabbit mAb5-溴-2-并噻唑 鐵標準溶液(1000mg/L,溶劑:5%鹽酸)CTLA-4 (D4E9I) Rabbit mAb (PE Conjuga)8-溴鳥苷 鐵標準溶液(500mg/L,溶劑:1%鹽酸)OX40 (D1S6L) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2-氨基噻唑-甲酸甲酯 鐵標準溶液(100μg/mL(20°C),基體:5%HCl)OX40 (D1S6L) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)(二氟甲氧基)甲 銦標準溶液(1000μg/ml,基體:1.0 mol/L 硝酸)TRXR1 (D1T3D) Rabbit mAb二芐基-N,N-二異基亞酰 銦標準溶液(100mg/L(20℃),基體:1%HCl)POMP (D2X9S) Rabbit mAb溴-羥基-5-硝基吡啶 鋰標準溶液(1000μg/ml)α-Actinin 4 (D7U5A) Rabbit mAb反式-氯-2-基羥鹽酸鹽 鋰標準溶液(100mg/L,基體:1%HCl)OX40 (D1S6L) Rabbit mAb (PE Conjuga)硝基-羥基喹啉 鉛標準溶液(500mg/L,溶劑:1%硝酸)Propionyl-Lysine [Prop-K] (D3A9R) Rabbit mAb5-甲基四唑 鉛標準溶液(100µg/mL,,基體:1%HNO3)VIMP (D1D1M) Rabbit mAb氯-異氧基酸 光滑念珠菌探針法熒光PCR檢測試劑盒酮酸激酶R型同工酶(R-PK)ELISA試劑盒IL-2 白介素2抗體()500 ul 酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA試劑盒IL-2 白細胞介素-2單克隆抗體100 ul 酮(MGO)ELISA試劑盒ITK/PSCTK2 IL-2誘導型T細胞激酶抗體500 ul 二酸單酰輔酶A(malonyl CoA)ELISA試劑盒IL-3 白介素3抗體500 ul 二(MDA)ELISA試劑盒IL-3R alpha/CD123 兔抗白介素3受體a鏈抗體100 ul 氨酸轉(zhuǎn)氨酶/谷轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)ELISA試劑盒IL-4 白介素4抗體(大、)100 ul 別孕酮/3α,5α-四氫孕酮(AP/3α,5α-THP)ELISA試劑盒IL-4 (human) 白介素4抗體()100 ul 表皮細胞活化肽因子(CAPF)ELISA試劑盒IL-4R 白細胞介素4受體抗體100 ul 表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域蛋白7(EGFL7)ELISA試劑盒IL-5 白細胞介素5抗體100 ul |